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SOCS1在人骨髓间充质干细胞中的表达以及稳定表达SOCS1间充质干细胞株的建立
目的 探讨不同炎性因子刺激下细胞因子信号转导抑制分子-1(suppressor of cytokine signaling1,SOCS1)在人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)中的表达情况,并研究稳定表达SOCS1的MSCs细胞株的建立方法.方法 用SOCS1相关炎性因子刺激剂处理24小时后裂解MSCs,Westen Blot检测各组细胞SOCS1的表达.通过Gateway技术,构建出表达SOCS1基因的载体质粒pFinal/PGK-puro-EF1 α-SOCS1-IRES-EGFP,将其与包装质粒共转染293FT细胞产生慢病毒,通过多次感染将载体导入人骨髓间充质干细胞,流式细胞术筛选出稳定表达SOCS1的人骨髓间充质干细胞,并用Westen Blotting、流式细胞术、成骨成脂肪诱导分化来鉴定.结果 SOCS1蛋白在IFN-γ、Pam3CSK4、Poly(I∶C)、LPS和ODN 2006刺激的MSCs中表达升高(P＜0.01).表达载体包装出的病毒感染后的MSCs中SOCS1蛋白水平提高,流式细胞检测表达(＞95％)CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166,不表达(＜2％)CD34和CD45,在相应诱导剂诱导下可分化为成骨细胞和脂肪细胞.结论 多种炎性因子能诱导MSCs内SOCS1表达升高,说明SOCS1可能参与了MSCs的免疫调节功能;成功建立了稳定表达SOCS1的MSCs细胞株.
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心源性猝死患者心肌SOCS-1和SOCS-3表达的研究
目的 探讨心源性猝死(sudden cardiac death,SCD)患者心肌中细胞因子信号转导抑制分子-1(suppressor of cytokine signaling-1,SOCS-1)和SOCS-3的表达及临床意义.方法 取2005-2006年中山大学法医学系的尸检心肌标本24例,其中9例尸检符合冠状动脉粥样硬化(非心肌梗死)导致SCD(简称非心梗组),7例尸检符合急性心肌梗死猝死(简称心梗组),对照组8例选择了因交通事故、外伤等所致死亡的患者.以RT-PCR法检测对照组、非心梗组和心梗组心肌中SOCS-1,SOCS-3的mRNA表达,用免疫组化法检测对照组、非心梗组和心梗组心肌中SOCS-1,SOCS-3的蛋白表达.数据以SPSS13.0统计学软件处理,采用方差分析检验.结果 非心梗组和心梗组患者心肌中SOCS-1 mRNA,SOCS-3 mRNA的表达量均显著高于对照组,分别为[(0.788±0.101),(0.741±0.111)vs.(0.436±0.044),P<0.01],及[(0.841±0.092),(0.776±0.070)vs.(0.454±0.076),P<0.01].非心梗组和心梗组患者心肌中SOCS-1的蛋白抗体阳性细胞数均显著高于对照组,分别为[(320.00±48.48),(347.14±70.88)vs.(42.50±10.35),P<0.01].非心梗组和心梗组患者心肌中SOCS-3的蛋白抗体阳性细胞数均显著高于对照组,分别为[(381.11±59.25)vs.(40.00±10.69),P<0.01]和[(332.86±111.91)vs.(40.00±10.69),P<0.01].结论 冠心病所致SCD患者的心肌中SOCS-1,SOCS-3的表达显著增加,提示它们可能参与了SCD的发病机制.
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乙型肝炎病毒X蛋白对细胞因子信号转导抑制分子-1 CpG岛基因甲基化及其表达的影响
目的 观察HBV X蛋白(HBx)对人源性非肿瘤性肝细胞株QSG7701细胞中细胞因子信号转导抑制分子-1 (SOCS-1)表达的影响,并通过研究SOCS-1基因启动子区CpG岛甲基化的情况以探讨HBx影响SOCS-1表达的可能机制. 方法 本研究室前期构建好的重组表达质粒pcDNA-X及空载体pcDNA3.0分别转染QSG7701细胞,经含G418的选择性培养基筛选获得稳定转染HBV-X基因的细胞克隆(pcDNA-X/QSG7701)及稳定转染空载体pcDNA3.0的细胞克隆(pcDNA3.0/QSG7701).实时逆转录PCR、Western blot分别检测3种细胞SOCS-1 mRNA和蛋白的相对表达情况.甲基化特异性PCR检测三种细胞SOCS-1基因启动子甲基化状态. 结果 实时逆转录PCR结果显示pcDNA-X/QSG7701中SOCS-1 mRNA相对表达水平为0.3249±0.0536,明显低于pcDNA3.0/QSG7701的1.0543±0.1937和未转染的细胞QSG7701 mRNA相对表达水平(设为1.0),三组比较,F=19.6,P＜0.05,差异有统计学意义.Western blot检测结果显示pcDNA-X/QSG7701中SOCS-1蛋白相对表达水平为0.1496±0.0106,明显低于pcDNA3.0/QSG7701的0.1984±0.0438及未转染的细胞QSG7701的0.2152±0.0816,三组比较,F=19.4,P＜0.05,差异有统计学意义.甲基化特异性PCR结果显示仅在pcDNA-X/QSG7701细胞株存在SOCS-1启动子区域的甲基化. 结论 HBx可下调SOCS-1的表达,使SOCS-1基因启动子CpG岛发生甲基化,这可能是HBx蛋白致肝细胞癌变的机制之一.
关键词： 肝炎病毒 乙型 DNA甲基化 细胞因子信号转导抑制分子-1 乙型肝炎病毒X蛋白
