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miR-646高表达抑制EGFR/Akt通路及肺癌细胞增殖扩散的研究
目的 探讨微小RNA(microRNA,miR)-646对EGFR/Akt通路的作用及对肺癌A549细胞增殖扩散的影响及相关的作用机制.方法 利用Lipo2000将miR-646转染到肺癌A549细胞中,采用实时荧光定量PCR(real time PCR,RT-PCR)法检测转染后各组细胞中miR-646的表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕和Transwell小室分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting法检测EGFR/Akt通路中各蛋白的变化水平.结果 RT-PCR结果显示,转染miR-646组其miR-646表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),A549细胞转染miR-646后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P＜0.05);Western blotting结果显示,转染miR-646组中p-EGFR和p-Akt的蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05).结论 miR-646可显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-Akt的蛋白水平,进而抑制细胞的增殖和扩散能力.
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miR-646抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移的机制初探
目的 探讨miR-646对骨肉瘤细胞增殖和迁移的抑制作用.方法 通过MTT实验检测miR-646过表达或受到抑制后对U2OS细胞增殖的影响.Transwell实验分析miR-646过表达或受到抑制后对U2OS细胞迁移的影响.MIRDB预测miR-646与表皮生长因子受体(EGFR)的位点结合后,利用荧光素酶报告及实验检测miR-646对EGFR的靶向作用,并通过Western blotting检测miR-646对EGFR通路的作用.结果 MTT结果表明,转染miR-646后U2OS细胞的增殖受到了显著地抑制,24 h时抑制率为21.76％± 1.05％,相反,当miR-646受到抑制后U2OS细胞的增殖得到了促进,24h时促进的比率为18.89％±0.81％.Transwell实验发现miR-646可以抑制骨肉瘤细胞系U2OS的迁移能力.随后MIRDB预测发现miR-646与EGFR的3'UTR区域具有结合位点,荧光素酶报告基因实验证明了miR-646可以直接作用于EGFR.Western blotting结果证明miR-646对U2OS细胞增殖迁移能力的抑制在一定程度上是通过miR-646对EGFR通路的抑制实现的.结论 miR-646可以通过抑制EGFR通路的活性,进而抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移功能.
