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冻干红细胞复水时体积响应显微观测及复水损伤机理探讨
冻干红细胞复水时造成的细胞损伤是目前红细胞冻干复水后回收率偏低的重要原因,主要表现复水时样品吸水,细胞环境溶液渗透压变化,细胞体积变化剧烈.了解复水时细胞体积响应对于了解冻干细胞复水损伤机理非常重要.本文中利用一种研究冻干细胞复水时体积响应的方法,即在环境扫描电镜下通过调整相对湿度来控制复水速度,显微跟踪观测细胞尺寸变化.结果 表明,在复水初始阶段红细胞厚度和直径先增大后减小,厚度方向变形能力和幅度比径向大.当体积偏移到一定程度时即发生溶血.因此为减小复水时溶血率,应控制复水条件、减小复水时细胞体积变化.
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二甲基亚砜在人红细胞冻干前负载海藻糖过程中的作用
目的 研究人红细胞冻干保存前负载海藻糖过程中二甲基亚砜(DMSO)的作用,优化红细胞负载缓冲液配方.方法 实验组以浓缩红细胞25份(10ml/份)负载海藻糖,负载缓冲液中添加DMSO;对照组25份负载海藻糖,负载缓冲液中未添加DMSO.37℃条件下孵育8h后,分别检测两组红细胞胞内海藻糖负载量、胞外游离血红蛋白水平、ATP含量、红细胞变形性,并利用流式细胞术检测负载后红细胞膜的完整性.结果 实验组与对照组红细胞的胞内海藻糖负载量分别为(57.033±4.883) mmol/L,(49.184±4.858)mmol/L(P＜0.05);胞外游离血红蛋白浓度分别为(4.131±0.473) g/L,(5.410±0.501 )g/L(P＜0.05);ATP浓度分别为(3.874±0.426)μmol/g Hb,(3.358±0.306)μmol/g Hb(P＜0.05);红细胞变形指数分别为0.330±0.0211,0.277±0.0232(P＜0.01);红细胞胞膜PS表达率分别为(5.04±0.495)%,(8.69±0.862)%(P＜0.01).结论 DMSO在红细胞负载海藻糖过程中可有效增加胞内海藻糖负载量,并显著改善负载缓冲液对红细胞胞膜的高渗损伤,更好地发挥海藻糖对红细胞的保护作用.
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海藻糖水替代机制对冻干红细胞保护作用的探讨
目的 探讨海藻糖对冻干红细胞复水回收率和残余水含量的影响及其对红细胞膜的保护机制.方法 将红细胞分别与100、200、400、600、800、1 000 mmol/L海藻糖负载溶液孵育,共6组,并设置对照组,用海藻糖检测试剂盒特异性检测红细胞中海藻糖加载量;用冷冻干燥机对红细胞做冷冻干燥,Karl-Fisher滴定法结合卡式炉法测定冻干红细胞中残余水含量;细胞计数仪检测复水后红细胞数目.结果 随着负载海藻糖溶液浓度的上升,冻干红细胞复水回收率先平稳后上升,当负载溶液浓度达到800 mmol/L时回收率高;残余水含量先保持不变,然后下降,当负载溶液浓度达到800和1 000 mmol/L时,残余水含量(％)3.47±0.21和2.43±0.18.此外,冻干红细胞组与冻干血影细胞组残余水相同.结论 初步证实了海藻糖通过水替代作用保护红细胞膜.
