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沉默效率文献资料
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RNA二级结构在siRNA设计中的应用
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种基因沉默现象,通过短双链RNA(small interfering RNA,siRNA)降解靶基因的信使RNA(message RNA,mRNA)以抑制基因的表达.在RNAi的应用中,设计高效的siRNA对RNAi的成功有重要作用.关于siRNA的设计已有很多设计原则可供参考,如MPI准则、Tuschl法则等.在此基础上,亦有研究进一步考察了 RNA二级结构对siRNA沉默效率的影响,并建立相关模型进行分析,如氢键系数、排斥环模型等.本文就RNA二级结构在siRNA设计过程中模型的建立及结论的验证做出论述与分析.
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3种方法制备的siRNA在RNAi中的初步比较
为初步比较化学合成法,载体表达法,表达框法制备的siRNA在RNAi中的沉默效率,先构建表达质粒Lamin-siRNA-pFIV和制备lamin-siRNA表达框,然后将3种彤式的siRNA转染到Hela细胞,通过qRT-PCR与Western Blotting法比较3种方法制备的siRNA在转染48 h后,LamirtA/C基因沉默效果.结果显示化学合成法制备的siRNA沉默效率65%,表达框法制备的siRNA沉默效率20%,质粒载体表达法没有表现出沉默效果.因此说在转染48 h后,化学合成法制备的siRNA沉默效率好,其次是表达框法制备的siRNA,质粒载体表达法未表现出沉默效果,需继续优化转染条件.
