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PP60C-SRC/ERK1/2信号通路调节大鼠精原干细胞活性
目的 研究PP60C-SRC通过磷酸化的细胞外调节激酶1/2(P-ERK1/2)调节体外培养的9日龄大鼠精原干细胞的活性.方法 用MTY观察反义C-SRC脱氧寡核苷酸(ODNs)及PD98059对精原干细胞活性的影响;用Western blot检测PP60G-SRC和P-ERK1/2的表达.结果 与空白对照组相比,10 μmol/L反义C-SRC ODNs作用12 h后精原干细胞活性下降了8.1%(P＜0.05),10 μmol/L PD98059作用24 h后精原干细胞活性下降了9.4%(P＜0.01).反义C-SRC ODNs组PP60C-SRC、P-ERK1/2蛋白表达与空白对照组相比分别下降了33.8%和45.3%(均P＜0.01);10 μmol/L PD98059作用精原干细胞24 h后,p-ERK1/2蛋白表达下降了34.5%.结论 PP60C-SRC可能通过P-ERK1/2蛋白而调节精原干细胞的活性.
关键词： 精原干细胞 PP60C-SRC 细胞外调节激酶1/2 大鼠 -
ADDLs通过阻断ERK1/2与h3 Calponin的结合影响细胞质ERK1/2活化
目的 探讨ADDLs对细胞质p-ERK1/2的影响,揭示ADDLs影响突触可塑性导致认知功能障碍的分子机制. 方法 采用体外培养的大鼠海马神经元. 免疫印迹方法观察ADDLs对p-ERK1 /2的影响,细胞组分分离方法探索ADDLs影响ERK1/2在神经元各部位活化的规律 ;免疫共沉淀的方法检测ERK1/2与h3 Calponin的结合以及ADDLs对两者结合的影响. 结果 ADDLs以时间依赖的方式降低了神经元中p-ERK1/2水平;AD-DLs对细胞质和细胞核部分ERK1/2的影响具有时序性,ADDLs作用1 h显著降低细胞质中p-ERK1 /2水平,作用6 h细胞核中的p-ERK1/2才显著降低;免疫共沉淀结果显示ADDLs作用1 h即可降低ERK1/2与h3 Calpo-nin的结合,而此时细胞核中p-CREB水平无显著变化. 结论 ADDLs作用早期首先通过阻断ERK1/2与h3 Calponin的结合影响细胞质ERK1 /2活化.
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G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1通过调节细胞外调节激酶1/2的活性促进成骨细胞迁移
目的 探索G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1(GIT1)在成骨细胞迁移中的作用,并分析其机理.方法 通过Western blot方法检测GIT1蛋白在鼠的成骨细胞内的表达;用免疫荧光染色方法确定:在血小板衍生生长因子(PDGF)不刺激和刺激的条件下,GIT1和细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)在成骨细胞内的位置;用共同免疫沉淀的方法测定GIT1和ERK1/2相互结合,并且用免疫荧光双染的方法确定这两种蛋白相互结合的位置;用包含GIT1-RNA发夹结构的腺病毒感染成骨细胞后,用免疫荧光染色方法确定磷酸化ERK1/2(pERK1/2)在成骨细胞内的位置,用划痕愈合法检测在PDGF刺激下的迁移能力.结果 在成骨细胞内,PDGF刺激导致了GIT1和ERK1/2的相互结合,并且这种结合发生在成骨细胞的局部粘附内.包含GIT1-RNA发夹结构的腺病毒明显抑制了pERK1/2招募至成骨细胞局部粘附内以及PDGF所刺激的成骨细胞的迁移.结论 在PDGF刺激下,GIT1招募pERK1/2至成骨细胞的局部粘附内,从而促进成骨细胞的迁移.
