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食欲素A促人胃癌SGC7901细胞凋亡
目的 观察食欲素A对胃癌SGC7901细胞生长的影响,并初步探讨其机制.方法 常规培养胃癌SGC7901细胞,单独食欲素A处理及食欲素A受体拮抗剂SB408124干预后再用食欲素A作用,MTT法检测药物对SGC7901细胞抑制率;Hoechst33258荧光染色法及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测BCL-2、BAX、Cyt c和活化caspase-3蛋白的表达.结果 食欲素A呈剂量-时间依赖性的抑制胃癌SGC7901细胞增殖,其中1.0 μmol/L食欲素A作用24h对胃癌细胞增殖的抑制作用强,抑制率为65.32％ ±2.51％ (P ＜0.01);食欲素A组可见较多凋亡细胞:胞核或胞质内可见浓染致密的蓝色荧光,有明显的核固缩,SB408124干预后,凋亡细胞数量明显减少(P＜0.05);食欲素A作用后,凋亡率为59.52％±1.38％,而SB408124干预后,凋亡率降至38.96％ ±1.82％(P＜0.05);食欲素A可上调凋亡相关蛋白BAX、Cyt c及活化caspase-3的表达,下调抗凋亡蛋白BCL-2的表达(P＜0.05),SB408124干预后,食欲素A作用减弱.结论 食欲素A对胃癌SGC7901细胞生长具有明显的抑制增殖和促凋亡作用;食欲素A的作用是通过其选择性受体实现的.
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食欲素A对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响及机制
目的 研究食欲素A(orexin A)对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响,及其可能作用机制.方法 以不同浓度的orexin A干预Hep G2细胞24h,MTT法检测细胞的增殖能力,筛选适的orexinA作用浓度.使用食欲素受体1选择性拮抗剂SB408124(10 μM)预处理细胞1h,然后用适浓度的orexinA干预细胞24h,实验设置为:正常对照组、溶剂对照组、orexinA组、SB408124+orexin A组.MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Hoechst染色观察细胞的形态变化,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cytochrome c和Cleaved-caspase-3蛋白的表达.结果 OrexinA以剂量依赖性方式明显抑制Hep G2细胞的生长,适宜浓度为0.5μM,细胞G0/G1期百分比(72.50％±1.32％)明显高于S期(19.6％9±1.15％).OrexinA促进Hep G2细胞凋亡,细胞凋亡率显著升高(P＜0.01).OrexinA显著上调Bax和Cleaved-caspase-3表达水平,下调Bcl-2和线粒体Cytochrome c表达水平.SB408124的干预能够减小orexin A对Hep G2细胞的影响.结论 OrexinA通过食欲素受体1抑制Hep G2细胞增殖并诱导其凋亡.
