首页 > 文献资料
-
江苏汉族人群FⅧ基因内微卫星DNA多态性研究及其在基因诊断中的应用
为研究江苏地区汉族人群FⅧ基因内微卫星DNA CA-13、CA-22的多态性,并探讨其在血友病甲基因诊断中的应用价值,我们用聚合酶链反应(PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的方法,分别检测了86名(131条X染色体)和74名(109条X染色体)江苏汉族人CA-13、CA-22的长度多态以及三个血友病甲家系成员这两个微卫星的长度变化.结果发现CA-13、CA-22分别有7种、4种等位片段,多态信息量(polymorphism information content,PIC)分别为0.5149、0.5202.用这两个微卫星进行家系连锁分析,两个家系得到诊断,并检出一名携带者.本研究表明微卫星标记CA-13、CA-22具有高多态性,联合应用这两个微卫星,理论上可使家系完整的血友病甲携带者检出率及产前诊断率达77%.利用微卫星标记进行连锁分析有望成为一种高效的血友病甲携带者检出及产前诊断的新方法.
-
广东地区正常人群DXS15,CA13,CA22位点多态性研究
本研究探讨广东人群中与FⅧ基因紧密连锁的微卫星DNA序列DXS15、CA13、CA22的多态性及其在血友病A基因诊断中的应用价值.用聚合酶链反应(PCR)和毛细管电泳的方法分析了中国广东地区无血缘关系的正常女性的3个位点长度多态性,其中包括111名女性的DXS15位点多态性.共222条X染色体;87名女性的CA13位点多态性,共174条X染色体;94名女性的CA22位点多态性,共188条X染色体.结果表明:中国广东人群中,DXS15位点检出11种等位片段,其长度范围是140-160 bp,杂合度为82%,多态信息含量(polymorphism informarion content,PIC)为0.82.CA13位点检出6种片段,其长度范围是145-155 bp,杂合度为56.2%,PIC值为0.56.CA22位点检出4种片段,其长度范围是79-85 bp,杂合度为50%,PIC为0.41.结论:研究人群与文献报道的白种人群相比发现,上述3种微卫星DNA多态性在种族和分布上有差异.DXS15、CA13、CA22在中国广东地区是具有高度多态性的遗传标记,可用于血友病A的连锁分析,对血友病A携带者的检出和产前诊断具名重要价值.
-
东北地区健康汉族人群FⅧ基因内含子13(CA)n多态分布的研究
目的:探讨东北地区健康人群FⅧ基因内含子13的二核苷酸CA重复多态分布,为甲型血友病基因诊断提供依据.方法:应用同位素(α-32P dCTP)掺入的PCR方法检测无遗传关系的健康汉族个体44例,男3例,女41例,总计85条X染色体.结果:检出7种不同长度的等位基因片段,其长度在130～150 bP之间,从短片段开始,依次为A,B,C,D,E,F,G.各等位基因频率为:A:0.0235,B:0.7647,C:0.0235,D:0.041,E:0.0706,F:0.0588,G:0.0118.计算可提供信息量为40.16%,实际检测到的杂合子率为39.02%(16/41).结论:FⅧ基因内含子13(CA)n多态可做为甲型血友病基因诊断的遗传标记.
-
我国汉族人群FⅧ基因14号外显子poly A区缺失或插入A热点突变分析
目的:对FⅧ基因14号外显子poly A区缺失或插入A进行热点突变分析.方法:采用活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间、纤维蛋白原、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)及血管性血友病因子抗原及活性(vWF:Ag、vWF:Act)等测定进行血友病A表型诊断,用长链聚合酶链反应和双重PCR进行FⅧ基因内含子22倒位及内含子1倒位检测,采用直接核苷酸测序法检测FⅧ基因启动子区、各外显子及其侧翼序列中的突变.用AccuCopyTM多重基因拷贝数检测试剂盒对未找到突变的患者进行拷贝数检测,采用多重PCR扩增FⅧ基因内外6个短串联重复序列(FⅧUp226、FⅧUp146、FⅧInt13、FⅧInt25、FⅧDown48、DXS1073)进行遗传连锁分析.结果:在近4年检测的343个血友病A家系中,发生于FⅧ基因14号外显子poly A区的插入或缺失A突变共32例,占总血友病A家系的9.33％,占小片段插入或缺失突变的42.11％.这些家系中多数为散发(21例),无血友病家族史,其中10例先证者的FⅧ基因突变为de novo突变.且部分患者表现为轻型或中型血友病(FⅧ:C 2％～10％).结论:FⅧ基因14号外显子A8/A9区的插入或缺失A为血友病A的突变热点,其致病机制可能与该区域的特殊结构导致的DNA聚合酶在DNA复制过程中的滑移、错配相关,而poly A区DNA复制、转录、蛋白翻译过程的二次错误又可能使患者的表型得到部分“纠正”.
-
中国汉族人群DXS15位点多态性研究及其应用
目的研究中国人群FⅧ基因旁微卫星序列DXS 15的多态性.方法用聚合酶链反应(PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,检测67名中国汉族人共103条X染色体DXS15位点的重复序列长度变化.结果中国人群中该位点有8种等位片段,多态信息量(polymorphism information content,PIC)为0 844.应用该位点多态性对一血友病甲家系进行连锁分析,一名可疑携带者被确认为正常人.结论该位点为血友病甲的高多态遗传标记之一,对血友病甲的携带者诊断和产前诊断具有重要价值.
-
中国汉族人群FⅧ基因内微卫星序列的多态性研究
目的 研究中国汉族人群FⅧ基因13内含子（CA）n重复序列（CA-13）的多态性。方法 用聚合酶链反应（PCR）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（测序胶）的方法，检测69名中国汉族人共103条X染色体的FⅧ基因CA-13的长度变化。结果 中国汉族人群中该位点有7种等位片段，多态信息量（PIC）为50.22％。结论 该位点为甲型血友病的高多态遗传标记之一，对甲型血友病的携带者诊断和产前诊断具有重要价值。
-
血友病A基因诊断研究进展
血友病A(hemophilia A,HA)为常见的X连锁隐性遗传性出血性疾病,其主要病因是由于凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷而引起的FⅧ含量不足或功能缺陷,发病率约为1/5 000男性[1-2],女性患者罕见.患者常出现自发性或外伤性出血不止,出血可发生在任何部位,但以关节出血为多见,反复多次关节出血可导致患者致残,甚至危及生命.
-
FⅧ基因内5个SNPs位点多态性对血友病A基因诊断的意义
目的 通过对FⅧ基因内5个单核苷酸多态性(SNP)位点的杂合度进行分析,以寻找新的可用于血友病A(HA)家系基因诊断的多态位点.方法 50例汉族正常女性血样用于5个SNP位点的多态性分析;收集16个无血缘关系的HA家系成员血样,将具有多态性的SNP位点用于家系连锁分析,评价其对HA基因诊断的意义.结果 5个FⅧ基因内SNP位点在所研究的人群中有3个位点具有多态性,即rs1509787、rs3861554和rs1470586,多态信息量分别为0.106 4、0.344 4和0.310 8.利用这3个SNP位点对16个家系中的7个家系可作出诊断,诊断率为43.75％,其中rs3861554对HA的诊断率高(31.5％).结论 在所选人群中有3个SNP位点具有多态性,对HA家系具有一定的诊断意义;rs3861554可作本地人群HA诊断的常用多态位点.
-
一例女性血友病A患者发病机制的探讨
目的 探讨1例血友病A(hemophilia A,HA)女性杂合患者患病的机制.方法 应用倒位移位聚合酶链反应(inverse shihing-polymerase chain reaction,IS-PCR)检测FⅧ基因缺陷;采用人雄激素受体检测(human androgen receptor,HUMARA assay)方法检测X染色体是否为非随机性失活;采用G显带法分析外周血细胞核型.结果 IS-PCR检测发现该患者FⅧ基因存在第22内含子远端倒位;HUMARA检测发现该患者X染色体为非随机性失活——母源X染色体比父源X染色体活性低,即携带有正常FⅧ基因的母源X染色体比携带有缺陷FⅧ基因的父源X染色体甲基化失活比率更高;G显带核型分析显示先证者染色体核型未见明显异常.结论 该血友病A女性患者的患病机制可能是由于X染色体非随机性不平衡失活引起的.
关键词： 血友病A FⅧ基因 倒位移位聚合酶链反应 人雄激素受体检测 随机性失活 -
LD-PCR检测FⅧ基因XbaⅠ位点多态性及其在血友病A携带者诊断中的应用
目的 建立高特异性的针对凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因内含子22中Xba Ⅰ多态性位点的连锁分析法,以用于血友病A家系携带者的诊断.方法 采用长距离PCR(LD-PCR)方法,特异性地扩增FⅧ基因内含子22中的XbaⅠ位点所在区域,用限制性内切酶XbaⅠ酶切,对5个血友病A家系作家系连锁分析,并对其中可提供多态性信息的家系作携带者诊断.结果 家系1中确诊女性携带者1名及1名正常女性成员；家系2中确诊1名女性携带者；而家系3、家系4和家系5该位点无法提供多态性信息.结论 基于LD-PCR的FⅧ基因Xba Ⅰ位点连锁分析方法具有较高的准确性和可靠性,这对临床上诊断血友病A携带者具有积极的意义.
-
中国人获得性血友病A患者中一个FⅧ基因多态性位点的发现
目的 研究8例中国人获得性血友病A患者的FⅧ基因变异,尝试寻找与疾病相关的潜在基因位点.方法对患者进行表型检测,包括APTT﹑FⅧ:C和FⅧ抑制物浓度的测定;采用LD-PCR和多重PCR分别检测FⅧ基因内含子22倒位和内含子1倒位,采用PCR产物直接测序的方法对FⅧ基因进行序列分析,寻找突变和多态性位点.结果 8例患者均表现为APTT延长,FⅧ:C降低,并且能够检测出浓度不等的FⅧ抑制物.在FⅧ基因3'UTR区域内发现c.8899 G/A(rs1050705)的多态性位点,其等位基因"A"的频率远高于另一等位基因"G"的频率.结论 c.8899 G/A(rs1050705)多态性位点的等位基因频率可能与获得性血友病A患者中FⅧ抑制物的形成存在一定的联系,这对进一步研究该疾病的分子发病机制具有重要意义.
-
血友病A病人FⅧ基因突变的检测
目的 了解血友病A病人FⅧ基因突变情况,探讨FⅧ基因突变与血友病A发生的相关性.方法 采用Sanger测序的方法,检测1例血友病A病人及其母亲FⅧ基因外显子编码区突变;采用多重连接探针扩增(MLPA)技术,检测病人FⅧ基因各个外显子是否发生缺失、重复突变;采用长距离聚合酶链式反应(LD-PCR)技术,检测病人FⅧ基因的内含子1、内含子22倒位突变.结果 血友病A病人检测到FⅧ基因2158位点一个半合子的致病突变,其母亲检测到同一位点的杂合突变.结论 血友病A病人FⅧ基因2158位点发现突变,该突变遗传自病人之母,可能是导致血友病A发病的致病性变异.
