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铜绿假单胞菌的信号分子3-oxo-C12-HSL促进小鼠MH-S肺泡巨噬细胞自噬
目的 探讨3-oxo-C12-HSL对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞自噬的影响.方法 用LasI基因(3-oxo-C12-HSL合成基因)缺失型和野生型的铜绿假单胞菌(PA)菌株的培养物上清液以及化学合成的3-oxo-C12-HSL信号分子处理MH-S细胞,激光共聚焦荧光显微镜观察LC3-GFP荧光斑点以及Western blot检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值来监测自噬的形成,同时检测p62的降解以及氯喹对LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值的影响来监测自噬流(autophagic flux)的变化.结果 野生型PA菌株的培养物上清液使MH-S细胞LC3-GFP荧光斑点增多(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增加(P<0.01),LasⅠ基因缺失型PA菌株不能引起上述自噬相关指标的改变.化学合成的3-oxo-C12-HSL信号分子能够明显增加自噬体数量,上调LC3Ⅱ的表达(P<0.01);自噬底物p62随着3-oxo-C12-HSL作用时间的延长而进行性降解,溶酶体抑制剂氯喹可增强3-oxo-C12-HSL引起的LC3Ⅱ累积(P<0.05,P<0.01).结论3-oxo-C12-HSL可增加MH-S细胞的自噬水平.
关键词： 自噬 3-oxo-C12-HSL 肺泡巨噬细胞 铜绿假单胞菌 -
pvdQ基因在铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌形态抑制作用中的功能
目的 拟研究长链高丝氨酸内酯降解基因pvdQ在铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌形态抑制作用中的功能.方法 通过乙酸锂转化法构建CAI-4 HWP1-LacZ菌株,使用X-gal平板显色法检测3-oxo-C12-HSL对白假丝酵母菌形态转换的影响;观察与铜绿假单胞菌pvdQ高表达株、野生株PAO1共同培养时,白假丝酵母菌的形态变化,了解pvdQ基因在铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌形态抑制作用中的功能.结果 400 μg 3-oxo-C12-HSL即可完全抑制白假丝酵母菌的形态转换.铜绿假单胞菌pvdQ高表达株和野生株PAO1均可抑制白假丝酵母菌菌丝形成.pvdQ高表达株对白假丝酵母菌的形态抑制作用较野生株PAO1减弱.结论铜绿假单胞菌通过分泌信号分子3-oxo-C12-HSL,可抑制白假丝酵母菌形态转换.随着pvdQ表达增加,铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌的形态抑制作用减弱,即pvdQ基因在铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌形态抑制作用中起负性调节作用.其作用机制可能与pvdQ基因对3-oxo-C12-HSL的水解作用有关.
关键词： 白假丝酵母菌 铜绿假单胞菌 pvdQ基因 3-oxo-C12-HSL
