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羊乳腺炎乳腺导管及腺泡铸型
目的 揭示金黄色葡萄球菌感染对泌乳期羊的乳腺导管及腺泡的三维立体构造的影响.方法 选取3头产后母羊并建立羊乳腺炎模型,在羊左侧乳腺注射浓度为1012CFU/L的金黄色葡萄球菌1 ml,右侧乳腺作为对照,注入1 ml生理盐水,羊的左侧乳腺在攻菌12h、24 h、36 h、48 h后,观察其临床症状.使用奶牛隐性乳房炎快速诊断技术(BMT)确认乳腺炎模型构造成功,取下乳腺后运用导管铸型技术获得羊乳腺导管、腺泡的铸型标本,利用扫描电子显微镜技术,检测乳腺小导管及腺泡的微观结构.结果 铸型标本结果显示,以输乳管为第1级,多可达14级分支,导管分支间未见吻合现象,各级分支导管与上一级导管主轴延长线的夹角＜ 90°.经扫描电子显微镜观察发现,正常乳腺导管末梢小导管管壁光滑,末端多呈膨大球状,腺泡直径(79.03±14.91) μm,金黄色葡萄球菌感染的乳腺导管表面有凹陷,末端大部分腺泡萎缩,腺泡直径(42.89±17.17) μm.结论 金黄色葡萄球菌感染能破坏乳腺腺泡的正常结构.
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骨膜去细胞生物支架的制备和鉴定
目的 制备兔骨膜去细胞生物支架,为骨缺损、骨不愈的组织工程研究提供天然的生物支架材料.方法 取健康新西兰大白兔,游离双侧胫骨近端内侧骨膜,通过物理冻融(-80℃,24h)、去污剂洗脱(triton-X 100、SDS)和酶消化(DNA酶、RNA酶)获取骨膜去细胞生物支架.通过HE染色、DAPI染色、琼脂糖电泳和基因组DNA定量分析(n=5)测定细胞结构及DNA成分残留;Masson染色和羟脯氨酸测定法(n=6)定性定量检测骨膜细胞外基质的主要成分(胶原)的保留情况;扫描电子显微镜下观察骨膜去细胞生物支架的表面微结构;CCK8法检测支架浸提液毒性;皮下包埋实验(n=4)观察该支架的免疫排斥反应.结果 HE染色和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色表明去细胞支架无残留细胞;琼脂糖电泳未见明显DNA条带;DNA定量检测显示组织去细胞率达95％以上;Masson染色及羟脯氨酸测定表明去细胞支架胶原成分被保留;扫描电子显微镜下细胞外基质呈现三维网状疏松结构;不同体积分数的浸提液对骨膜细胞的增殖与对照组(普通培养基)比较无明显抑制作用(P＞0.05);异体皮下包埋实验显示,该去细胞支架免疫排斥反应不明显.结论 运用物理冻融、去污剂洗脱和酶消化等方法所获取的骨膜去细胞生物支架细胞去除彻底,细胞外基质的结构及主要成分保留完好,生物相容性良好.
