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PML-RARα/pIRES和PML-RARα/pSecTag重组载体的构建和鉴定
目的 构建PML-RARα基因重组表达质粒,为发展PML-RARα基因疫苗提供实验依据. 方法利用RT-PCR方法从急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞中扩增出465 bp 的位于PML-RARα融合基因的框内结构的片段,克隆至真核表达载体pIRES和分泌载体pSecTag后,经酶切和序列分析鉴定重组质粒的构建情况.结果 经酶切鉴定和序列测定表明,PML-RARα目的基因已正确插入真核表达载体中,构成了目的重组载体. 结论成功构建了PML-RARα/pIRES和PML-RARα/pSecTag重组真核表达质粒,可进一步用于PML-RARα基因疫苗的实验研究.
关键词： PML-RARα基因 克隆 重组载体 急性早幼粒细胞白血病 -
内源性上调pp-GalNAc-T4基因表达抑制全反式维甲酸诱导NB4白血病细胞分化的机制研究
目的：上调pp-GalNAc-T4基因表达抑制全反式维甲酸诱导的NB4白血病细胞分化的机制探讨。方法用全反式维甲酸处理NB4白血病细胞和转染了pp-GalNAc-T4基因的NB4细胞及转染了空载体的NB4细胞，用实时PCR观察这三组细胞的PML-RARα基因表达情况。结果用全反式维甲酸处理转染了pp-GalNAc-T4基因的NB4细胞（NB4-T4细胞株）后，癌蛋白PML-RARα基因表达在NB4-T4细胞株，明显高于未转染pp-GalNAc-T4基因的NB4细胞和转染空载体的NB4细胞（P<0.01）。结论内源性上调pp-GalNAc-T4后，接着用全反式维甲酸诱导NB4-T4细胞。NB4-T4细胞中PML-RARα基因表达升高，而且NB4-T4细胞没有分化。这些提示，pp-GalNAc-T4可以抑制全反式维甲酸诱导的NB4细胞的分化作用，可能和癌蛋白PML-RARα有关。
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急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因的临床研究
目的研究急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因的亚型、变化及其临床意义.方法采用筑巢式逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测初治APL患者PML-RARα融合基因,监测完全缓解者微小残留病灶.结果32例初治APL患者PML-RARα融合基因均为阳性(100%),其中S型为25%,L型为75%.L型的复发率及早期病死率分别为12.5%、12.5%,显著低于S型的复发率及早期病死率(25%和37.5%).L型患者的预后比S型患者好.采用全反式维甲酸(ATRA)及小剂量高三尖杉酯碱诱导治疗,缓解后分别用化疗与维甲酸交替进行强化治疗,使PML-RARα阳性率随缓解期的延长而逐渐降低.同时监测16例APL缓解患者,PML-RARα融合基因阴性患者可长期生存.结论PML-RARα融合基因的检测对APL的确诊、预测预后具有重要的临床意义.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 PML-RARα基因 -
PML-RARα和hGM-CSF双基因表达载体的构建
目的:构建急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARα基因与人粒巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因真核双表达载体,为利用DNA疫苗治疗APL奠定基础.方法:利用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增出PML-RARα融合点附近的部分基因片段,通过PCR从pORF-hGM-CSF质粒中扩增出hGM-CSF基因,并分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克隆位点(MCS)A和B中,构建真核双表达载体.利用酶切和序列分析方法验证所构建载体的正确性.结果:Nhe I/Mlu I和Xba I/Sal I双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα基因片段及hGM-CSF基因,且序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确.结论:成功构建了含有PML-RARα基因及hGM-CSF基因的真核双表达载体.
关键词： PML-RARα基因 hGM-CSF基因 早幼粒细胞白血病 DNA疫苗 -
急性早幼粒细胞白血病患者外周血单个核细胞PML-RARα融合基因检测和意义
目的：探讨PM L‐RA Rα融合基因与急性早幼粒细胞白血病（A PL ）的相关性。方法：利用实时荧光定量PCR检测50例APL患者血液标本（骨髓／外周血）中PML‐RARα融合基因含量，30例健康体检者作为正常对照组。结果：50例A PL患者血液标本中PM L‐RA Rα融合基因含量阳性47例（94％；47／50），阴性3例（6％；3／50）。正常对照组均阴性，APL组阳性率明显高于正常对照组，差异具有统计学意义。30例治疗后血液学完全缓解的患者治疗前后进行PM L‐RA Rα融合基因的检测，其中25例患者（25／30；83．3％）的PM L‐RA Rα融合基因拷贝数较治疗前有明显降低，差异具有统计学意义。另16．7％（5／30）患者复发时PML‐RARα融合基因拷贝数明显增高，与初诊时无明显差异。结论：检测PM L‐RA Rα融合基因对A PL患者在诊断、疗效观察和预后判断等方面都具有重要意义。
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探析急性早幼粒细胞白血病患者外周血单个核细胞PML-RARα 融合基因检测及其意义
目的 探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)与PML-RARα融合基因的相关性.方法 选取我院2015年3月~2016年6月APL住院的患者60例为研究对象,采用实时荧光定量PCR进行检测.结果 急性早幼粒细胞白血病患者血液标本中,PML-RARα融合基因含量阳性者56例(93%),PML-RARα融合基因含量阴性者4例(7%).正常对照组均呈阴性,急性早幼粒细胞白血病组阳性率显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05).40例经过治疗后的患者治疗前后进行PML-ARAα融合基因的检测,35例患者(87.5%)的PML-RARα融合基因的拷贝数比接受治疗前出现显著降低情况,差异有统计学意义(P<0.05).12.5%的患者出现病情反复时,PML-RARα融合基因出现了明显变化,期拷贝数呈现出上升趋势,这种情况与患者进行初次诊断时相似.结论 对PML-RARα融合基因进行科学的检测,对急性早幼粒细胞白血病患者在病情诊断、观察疗效和预后判断等多种方面都具有重大意义.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 PML-RARα基因 基因融合
