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牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因的克隆及其表达产物的抗原性鉴定
目的 克隆与高效表达无乳链球菌细胞表面菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因编码蛋白抗原优势区,并进行抗原性分析及鉴定.方法 根据GenBank上公布的牛乳腺炎无乳链球菌辅助蛋白APl(EU929387.1)基因序列,利用生物信息学学软件Primer5.0和DNA MAN,根据其辅助蛋白保守序列设计、合成1对克隆引物,以分离于内蒙古东部地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模板,PCR扩增辅助蛋白AP1基因序列,经克隆与测序后构建重组表达载体APl-pET30,转化大肠埃希菌BL21,并进行高效表达,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定.结果 克隆的抗原表位序列片段大小为714 bp,编码238氨基酸残基,与GenBank公布的APl(EU929387.1)基因序列相似性为99.72％,氨基酸残基相似性为99.58％.构建的重组表达载体经诱导表达可溶性蛋白,纯化后重组蛋白的纯度＞95％,Western blot分析重组蛋白能被牛源无乳链球菌阳性血清识别.结论 成功构建了pET-30a-AP1重组表达载体,该载体能可溶性表达重组蛋白,表达产物具有良好抗原反应性,为进一步研究辅助蛋白AP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定奠定了实验基础.
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增生性瘢痕组织中AP1表达意义的初步研究
目的 通过比较人增生性瘢痕与正常皮肤组织中AP1基因表达水平,研究AP1基因在增生性瘢痕中发生的表达改变,并探讨其意义.方法 分别收集正常皮肤及增生性瘢痕组织,应用RT-PCR方法检测AP1 mRNA在正常皮肤和增牛性瘢痕组织中的表达水平:应用Western-blot技术比较AP1蛋白质在正常皮肤和增生性瘢痕组织中的表达差异.结果 AP1 mRNA在正常皮肤和增生性瘢痕组织中的表达差异显著(p＜0.05).AP1蛋白质在增生性瘢痕组织中的表达高于正常皮肤,二者差异显著(p＜0.05).结论 增生性瘢痕组织中AP1 mRNA及蛋白质都存在着明显的高表达,这种变化的原因还需进一步研究.
