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Huins基因文献资料
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细粒棘球蚴胰岛素受体(EgInsR)与人胰岛素(Huins)酵母双杂交载体的构建及自激活鉴定
目的 构建细粒棘球蚴(Eg)胰岛素受体(InsR)与人胰岛素(Huins)酵母双杂交系统,检测表达蛋白对报告基因的自激活活性及对酵母菌的毒性. 方法 从Eg cDNA中扩增EgInsR基因和Huins编码序列,分别将EgInsR基因和Huins编码序列克隆人酵母双杂交载体pGADT7和pGBKT7中并进行限制性酶切鉴定和测序鉴定,鉴定正确的重组载体采用PEG/LiAc法转化酵母菌,检测诱饵蛋白对酵母菌生长的自激活活性和毒性. 结果 扩增的EgInsR和Huins基因编码区全长分别为1 122 bp和261 bp.构建的pGADT7-EgInsR及pGBKT7-Huins两组重组质粒转化Y2HGold酵母菌表达的蛋白对Y2HGold无毒性及自激活作用. 结论 构建的EgInsR基因和Huins基因重组载体表达蛋白对Y2HGold酵母菌无毒性和自激活作用,为研究Eg与中间宿主的交互作用机制奠定了基础.
