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YBR-Green1文献资料
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弓形虫SYBR-Green1荧光定量PCR检测方法的建立及应用
目的 建立SYBR-Green1荧光定量PCR检测弓形虫的方法,并进行实验室方法学评价.方法 常规PCR扩增弓形虫RH株高度保守的B1基因部分序列,经TA克隆后转化入大肠埃希菌JM109中.提取重组质粒,PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR-Green1荧光定量PCR标准曲线,并做重复性试验,对桂弓、B36虫株及恶性疟原虫、血吸虫基因组DNA、30份孕产妇标本、1 221份无偿献血者标本进行检测.结果 用重组质粒制作的标准曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数0.997,平均试验间变异系数0.81%,检测桂弓、B36虫株均为阳性,而检测血吸虫、恶性疟原虫基因组DNA均为阴性;孕产妇检测阳性率16.7%,平均拷贝数为1.19×105copies/μl;无偿献血者阳性率为0.74%,平均拷贝数为1.17×105 copies/μl.结论 成功建立了检测弓形虫B1基因的SYBR-Green1荧光定量PCR方法,较常规PCR技术更快捷、敏感、准确,适合临床实验室及无偿献血者的筛查使用.
关键词： 弓形虫 YBR-Green1 光定量PCR RH株 B1基因
