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聚苯乙烯-孕酮免疫微球的新法制备与检测
本研究采用改进的无乳化剂乳液聚合法制备聚苯乙烯微球,并对聚合反应温度和有机溶剂含量对聚合反应和粒径的影响进行了研究;再将合成的聚苯乙烯微球与孕酮抗体反应,结果表明通过加入少量有机溶剂,提高了聚合反应速度和转化率,制备出了粒径可控的单分散聚苯乙烯免疫微球,粒径在200～800nm之间,微球具有较高的抗体结合容量,且结合后保持了较高的抗体活性.用合成的孕酮免疫胶乳进行免疫凝集实验,观察了反应时间,反应温度的影响,确定了免疫反应的基本反应条件.
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抑制翼状胬肉术后血管增生免疫纳米微球VEGF McAb-PLA（Tet）-NP 的制备方法研究
目的：探讨制备抑制翼状胬肉术后血管增生免疫纳米微球，即血管内皮生长因子单克隆抗体-聚乳酸（汉防已甲素）-纳米微粒[ VEGF McAb-PLA（ Tet）-NP]的制备方法。方法采用复乳法，以天然中药Tet作为试验药物，以PLA为包封材料，制备汉防已甲素聚乳酸纳米微粒[PLA（Tet）-NP]。观察其表面形态、结构、粒径及电动电位（ Zeta电位）。采用碳二亚胺法将Tet聚乳酸纳米微球PLA（Tet）-NP与抗人VEGF McAb连接，制备免疫纳米微球。观察其表面形态、结构、粒径及Zeta电位。结果成功制备出了PLA（Tet）-NP及VEGF McAb-PLA（Tet）-NP。微粒的表征：类圆形囊泡，均质，粒径大小约为200～242nm，Zeta电位为－7．7mv。结论通过聚乳酸为包封材料，可成功制备出载药PLA（ Tet）-NP，采用碳二亚胺法与抗人VEGF McAb成功连接。为今后进一步开展抑制翼状胬肉术后血管增生的研究奠定了基础。
关键词： 汉防已甲素(Tet) 聚乳酸 NP 免疫微球 VEGF -
食品中违法添加奥沙普嗪的荧光免疫层析方法研究
目的 建立一种筛查食品中违法添加的奥沙普嗪荧光微球免疫层析法(FICA).方法 以改良活泼酯法将奥沙普嗪连接到牛血白蛋白和卵清白蛋白,合成免疫抗原和检测抗原,免疫家兔获得针对抗奥沙普嗪抗体;以抗体标记的荧光微球(40 nm),在检测线和质控线发生免疫反应,分别形成荧光检测信号,构建荧光免疫层析方法.结果 在ELISA体系检测奥沙普嗪的IC50值为13.2 ng·mL 1,与8种相关药物交叉反应率都小于0.1％,优化FICA试剂条对奥沙普嗪的低检测限为2.0 ng·mL-1.优化的FICA试剂对50个市售样品的检测结果,与HPLC验证结果吻合.结论 本方法灵敏、特异、简便、快速,是筛查食品中违法添加奥沙普嗪的有效工具.
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特异性肿瘤坏死因子-α免疫吸附柱的研制及其吸附率的实验研究
目的制备特异性肿瘤坏死因子-α免疫吸附柱,并测试其吸附性能.方法采用自行设计定制的过滤柱,其内装入以PSM为载体,依次包被PLL及抗rHTNF-α McAb而制备的免疫微球,制成特异性免疫吸附柱,观察吸附柱对3种不同浓度的2种TNF-α溶液的吸附率以及柱效稳定性和重复使用情况.结果该吸附柱的大吸附量均达到90%以上,抗原含量与大吸附量及大吸附时间成反比.pH值3.0的PBS可将98.3%的rhTNF-α自微球上洗脱,吸附柱缓冲后的吸附率仍达96%.结论特异性TNF-α免疫吸附柱对TNF-α有极佳的吸附率,且柱效稳定,可以重复使用.
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构建肿瘤坏死因子-α免疫微球的实验研究
前瞻性构建肿瘤坏死因子-α免疫微球,以期为将来进一步研究能应用于特异性清除TNF-α的血液净化方法,奠定实验基础.采用以PSM为载体,依次包被PLL及rHTNF-α McAb的方法而制备的免疫微球,分别以异硫氰酸荧光素标记,应用倒置显微镜及荧光显微镜观察、分光光度计测定等方法,探讨吸附微球的包被条件.结果显示,20℃、pH9.5、60 min三者为PLL包被PSM的佳条件.包被后的洗脱液检测结果显示PLL含量无明显变化,说明PLL在PSM表面包被较为牢固.在相同温度及包被时间内,应用浓度为0.2%的戊二醛溶液进行的rHTNF-α McAb对PLL的包被结合牢固.实验表明,所构建的肿瘤坏死因子-α免疫微球,达到了预期的目的,可以作为一种新颖的免疫吸附材料.该方法简单,价格便宜,为相关实验研究提供了一种崭新方法.
