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抗体/腺病毒复合物为载体的基因定位递送
临床基因治疗方案中基因载体在疾病部位的靶向递送仍是急待解决的问题.本研究将腺病毒与一种生物素化的特异性抗腺病毒六邻体的多克隆IgG结合,固定于结合了亲和素的胶原蛋白膜上,成功获得腺病毒载体基因靶向定位递送体系.体外稳定性研究结果表明该体系中病毒载体可有效保持活性.通过这种特异性抗体偶联方式,将携带单纯疱疹胸苷激酶(HSVtk)编码基因片断的腺病毒结合在胶原膜上转染大鼠平滑肌细胞(A10),加入更昔洛韦(ganciclovir)后,只有生长在胶原膜上及膜邻近50μm内的细胞被杀死.在使用非特异性抗体的对照实验中,整个培养基范围内的细胞几乎全被杀死.以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因对猪的心肌进行转基因实验,结果显示注射特异性抗体偶联病毒的胶原凝胶比直接注射病毒悬液获得更高效的心室基因表达.所有研究结果表明,通过生物素和特异性抗体使病毒载体固定在胶原蛋白基质上,可达到有效的局部定位基因表达,避免向非病灶部位的扩散,是基因治疗中一种极具发展潜力的载体定位递送方法.
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偶联单克隆抗体的聚氨酯膜在基因定位递送中的应用
目的研究偶联单克隆抗体胶原涂覆的聚氨酯膜在基因定位递送中的应用.方法将抗腺病毒纤突的单克隆F(ab)'2抗体通过巯基反应共价键偶联到胶原涂覆的聚氨酯膜上,再通过抗体-抗原特异性反应携带病毒基因载体,得到局部定位的基因运载体系.用报告基因进行平滑肌细胞(A10细胞)的体外转染实验和模拟生理条件的稳定性实验.结果体外细胞转染实验显示,该方法携带的载基因病毒在A10细胞中实现了高效、高度定位的基因表达.模仿生理条件的体外稳定性实验表明,通过抗体结合在PU膜上的载基因病毒可缓慢持续地释放出来,有效地转染A10细胞达20 d左右.结论这种经抗病毒抗体连接固定于胶原涂覆聚氨酯膜的病毒能很好地局部定位递送基因,可望用于临床基因治疗.
关键词： 聚氨酯膜 抗腺病毒纤突的单克隆F(ab)'2抗体 基因载体 定位递送
