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AMN107联合血红素加氧酶-1抑制剂诱导慢性髓系白血病细胞凋亡
运用AMN107(尼洛替尼)联合血红素加氧酶-1(HO-1)抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)作用于慢性髓系白血病(CML)细胞株K562细胞,研究其对CML细胞增殖的影响并探讨其作用机制.采用MTT法和台盼蓝染色法检测AMN107( 10 μmol/L)及ZnPPⅨ(10 μmoL/L)单独或联合处理不同时间的细胞增殖率；半定量RT-PCR法和Western blot法检测空白对照组、ZnPPⅨ(10 μmol/L)组、AMN107( 10 μmol/L)组、AMN107( 10 μmol/L)联合ZnPPⅨ(10μmoL/L)组48 h时细胞HO-1的表达；Annexin V/PI双染色法检测处理48 h时各组细胞凋亡情况.结果表明:联合用药对细胞的抑制作用强,且呈时间依赖性；联合用药组HO-1的表达量低；空白对照组、ZnPPⅨ(10μmoL/L)组、AMN107(10 μmoL/L)组、AMN107(10μmoL/L)联合ZnPPⅨ(10 μmol/L)组48 h时细胞凋亡率分别为(11.38±0.02)％、(17.44±0.08)％、(39.81±0.07)％和(56.46±0.19)％.结论:第二代酪氨酸激酶抑制剂AMN107具有诱导CML细胞凋亡的作用；抑制HO-1表达能加强AMN107对CML细胞的杀伤作用,这为临床进一步提高CML的疗效提供实验依据.
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高压氧预处理诱导血红素加氧酶-1减轻大鼠脑出血后脑水肿
目的 研究血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在高压氧预处理(hyperbaic oxygen preconditioning,HBOP)减轻大鼠脑出血后脑水肿形成过程中的作用.方法 本实验共选用54只雄性Spradgue-Dawley大鼠,体质量300～ 350 g,分为两部分:第1部分,6只大鼠随机(随机数字法)分为两组(n=3),分别接受高压氧预处理(HBOP组)或假预处理(假预处理组);预处理结束24 h后处死,取基底节组织,采用Western blot法检测HO-1蛋白含量.第2部分:48只SD大鼠随机(随机数字法)分为四组(n=12),各组大鼠在预处理前腹腔内置入含HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(zinc protoporphyrinⅨ,ZnPPⅨ)的缓泵(0.01mg/kg)(HBOP+ ZnPP组、假预处理+ ZnPP组)或含2 mL二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)载体溶剂的缓释泵作为对照(HBOP+ DMSO组、假预处理+DMSO组),随后接受高压氧预处理(HBOP组+ZnPP组,HBOP+DMSO组)或假预处理(假预处理+ZnPP组,假预处理+DMSO组).预处理结束24h后,立体定向基底节内注射自体股动脉血100 μL建立基底节脑出血模型,72 h后处死,采用干湿质量法测定脑组织水含量.统计学分析采用Stata 7.0软件进行成组设计资料的t检验.结果 HBOP组大鼠基底节组织内HO-1蛋白含量与假预处理相比差异具有统计学意义(P＜0.05);HBOP+ DMSO组大鼠血肿同侧基底节组织水含量为(81.4±0.9)％,显著低于假预处理+ DMSO组(82.6±0.8)％(P＜0.05),但大鼠接受高压氧预处理同时腹腔内给予HO-1抑制剂ZnPPⅨ则抵消了HBOP减轻脑出血后脑水肿的效应[(82.8±0.9)％vs.(82.6±0.7)％(P＞0.05)].结论 高压氧预处理显著减轻大鼠脑出血后脑水肿,其作用机制与其上调HO-1蛋白的表达有关.
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血红素氧合酶-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ对裸鼠胃癌腹膜转移的抑制作用
前期研究证实血红素氧合酶-1(HO-1)是与人胃癌腹膜高转移细胞株GC9811-P具有亲和力的多肽序列PⅢ的天然配体,两者结合可能抑制胃癌的腹膜转移.目的:探讨HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)对裸鼠胃癌腹膜转移的抑制作用及其可能机制.方法:48只BALB/c裸鼠经GC9811-P胃癌组织块胃壁原位种植建立胃癌腹膜转移模型后随机分为3组,于术后1周起分别予ZnPPⅨ、钴原卟啉(CoPPⅨ,HO-1诱导剂)或铜原卟啉(CuPPⅨ,阴性对照)40μg隔日腹腔注射.术后第23 d每组取6只裸鼠处死,测定腹膜转移结节数量、体积、质量和腹水量.其余裸鼠用于存活率实验,于出现明显生命衰竭体征时处死,以免疫组化方法检测腹膜转移瘤中CD31标记的肿瘤微血管密度(MVD),以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血管内皮生长因子(VEGF)含量.结果:与CoPPⅨ组和CuPPⅨ组相比,ZnPPⅨ组荷瘤裸鼠腹膜转移结节数量、体积、质量和腹水量均显著减低(P＜0.05).生存期延长(P＜0.01),腹膜转移瘤MVD和VEGF含量降低(P＜0.05).结论:HO-1参与了胃癌腹膜转移的调控,其抑制剂ZnPPⅨ可能通过抑制肿瘤血管发生而抑制裸鼠胃癌腹膜转移.
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ZnPP Ⅸ对肝癌耐药细胞株Bel/Fu表达HO-1、GST-π及化疗敏感性的影响
目的 评估锌原卟啉(ZnPP)Ⅸ对肝癌耐药细胞株化疗药物敏感性及其表达血红素加氧酶-1(hemeoxygenase,HO-1)和谷胱甘肽-S-转移酶-π(glutathione-S-transferase-π,GST-π)的影响,探讨ZnPP Ⅸ作为化疗耐药逆转剂的可能性及相关作用机理.方法 ①ZnPP Ⅸ作用于肝癌耐药细胞株Bel/Fu后,应用MTT法检测阿霉素、丝裂霉素及5-氟尿嘧啶的半数抑制浓度(IC<,50>).②不同浓度ZnPP Ⅸ作用于Bel/Fu细胞后,应用RT-PCR法检测细胞HO-1及GST-π mRNA的表达量.结果 ZnPP Ⅸ作用于Bel/Fu细胞24 h后,各化疗药物的IC<,50>均明显降低(P<0.05);HO-1 mRNA及GST-π mRNA的表达量显著降低(P<0.01),且均呈剂量依赖趋势(P<0.01).结论 ZnPP Ⅸ通过抑制HO-1和GST-π的表达,使肝癌耐药细胞株的化疗敏感性增高.ZnPP Ⅸ可作为一种潜在的化疗耐药逆转剂.
关键词： 化疗耐药性 肝癌细胞 谷胱甘肽-S-转移酶-π 血红素加氧酶-1 锌原卟啉Ⅸ
