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IL6D24-PE40KDEL文献资料
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新型重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白的理化分析
为了对构建成功的新型重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白的部分物化表征进行分析鉴定,采用Edman法、SDS-PAGE法、胰蛋白酶消化的MALDI-TOF-MS质谱法、蛋白印迹法和MTT法分别测定该融合蛋白的N-末端6个氨基酸、相对分子量、肽谱、抗原特异性以及靶向杀伤生物学活性.结果表明:所构建表达纯化的新型重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白N末端6个氨基酸序列为Met-Ile-Asp-Lys-Gln-Ile-,而IL-6缺失24个氨基酸后的原序列为Ile-Asp-Lys-Gln-Ile-,由于采用了大肠杆菌表达系统,因此在N末端第1位多出了1个Met,经12%SDS-PAGE蛋白电泳和凝胶成像系统分析计算,其相对分子量为58.75 kD,与理论值56.9 kD相比误差在5%之内.MALTI-TOF-MS质谱测定共获得10个与理论预测值相符的肽段,经瑞士生物信息研究所的EXPASY分子生物服务网站的Peptident数据库搜索证明,在分子量为57 kD左右的范围内未检索到与上述条件相符的已知蛋白,证明本融合蛋白为全新蛋白,与预测的目的蛋白相符.WB实验显示II6D24-PE40KDEI外毒素融合蛋白能与IL-6及PEA抗体特异性结合.MTT生物活性测定表明,该融合蛋白对表达IL-6R的多发性骨髓瘤细胞系U266产生特异性杀伤,而对不表达IL6R的CEM淋巴细胞系无任何杀伤.结论:所研制成功的重组IL6D24-PE40KDL外毒素融合蛋白的确为一全新的具有靶向杀伤生物活性的蛋白质,与设计的完全一致,同时也证实了构建策略的可行性.
关键词： 外毒素融合蛋白 IL6D24-PE40KDEL 纯化鉴定
