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用于荧光原位杂交技术的骨髓细胞制片方法研究
本研究对传统的骨髓细胞制片方法进行改良,探讨其对荧光原位杂交(FISH)信号的影响,为骨髓标本FISH检测提供佳的制片方法.采用缺口平移的方法,制作出SpectrumGreen-C-myc,PromoFluor-555-MDM2,PromoFluor-415-STK6三色荧光杂交探针.将采集到的5例骨髓标本进行2种方法制片,传统方法:用低渗的方法去除红细胞,甲醇/冰醋酸(3:1)固定细胞后进行细胞甩片；改进方法:用密度梯度离心的方法去除红细胞,细胞甩片后用甲醇固定细胞,再用2％甲醛固定细胞,将固定好的细胞进行FISH检测并比较两种方法获得的平均荧光信号强度,背景信号强度以及荧光信号的分裂率.结果表明:在Spectrum Green,PromoFluor-555和PromoFluor-415 3个通道中,传统方法制片HSH平均荧光信号强度与背景强度的比值为4.3 ±0.19,3.52±0.04,3.07±0.08,改进方法为9.89 ±0.41,7.55±0.5,5.67±0.18,(P＜0.01)；改进方法在3个通道中获得的荧光信号强度分别为传统方法的2.32,2.14和1.85倍；同时该方法减少了荧光信号的分裂率,传统方法荧光信号的分裂率分别为(15.8±1.74)％,(20.42±2.88)％,(23.2±3.02)％,改进方法分别为(8.6±1.2)％,(12.28±1.33)％,(12.6±2.56)％(P＜0.05).结论:采用改进后的骨髓制片方法有效地提高了FISH检测的荧光信号强度,明显降低了荧光信号的分裂现象,而且该方法易于掌握,程序简单.本研究为FISH检测骨髓标本提供了一种更佳的制片方法.
