首页 > 文献资料
-
658例结直肠癌错配修复蛋白的表达及其与临床病理特征的关系
目的 探讨错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白MLH1、MSH2、MSH6和PMS2在结直肠癌中的表达情况及其与患者临床病理特征之间的关系.方法 收集中国医科大学附属盛京医院2016年1月至2017年1月间658例连续的结直肠癌病例,患者中男性409例,女性249例;年龄20～92岁,平均年龄(63±5)岁.采用免疫组织化学EnVision法检测结直肠癌组织中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白表达缺失的情况,和MLH1蛋白表达缺失的结肠癌病例中的BRAF突变,分析MMR蛋白表达缺失与结直肠癌患者临床病理特征之间的关系.结果 658例结直肠癌有44例(6.7％)发生MMR蛋白表达缺失,MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白表达缺失率分别为4.1％(27/658)、2.3％(15/658)、2.4％(16/658)、4.3％(28/658).MMR蛋白表达缺失以MLH1与PMS2表达联合缺失(61.4％,27/44)、MSH2与MSH6表达联合缺失(34.1％,15/44)为主;PMS2和MSH6蛋白表达单独缺失的各有1例(2.3％,1/44).进行BRAF V600E检测的27例MLH1蛋白缺失的病例中有7例(25.9％)为BRAF阳性,提示该7例患者可能存在因BRAF基因突变导致的MLH1蛋白表达缺失,属于散发型结直肠癌.结直肠癌组织中MMR蛋白表达缺失与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、脉管癌栓、临床分期以及肿瘤血行转移无关(P>0.05),与更低程度的肿瘤组织分化、组织学类型和发病部位以及肿瘤浸润淋巴细胞数目增加显著相关(P<0.01);其中MLH1、PMS2蛋白表达缺失与组织学类型相关(P=0.049,P=0.013),常伴黏液腺癌分化;MLH1、PMS2蛋白表达缺失多发生于右半结肠(P=0.006,P=0.002);MSH2与MSH6蛋白表达缺失的患者发病年龄相对较小(P=0.014,P=0.023);MSH2与PMS2蛋白表达缺失与性别相关,MSH2蛋白缺失多发生于女性(P=0.048),PMS2蛋白表达缺失多发生于男性(P=0.031).结论 MMR蛋白缺失结直肠癌患者发病年龄低,组织分化程度低,发生部位多位于右半结肠,癌组织常伴有黏液腺癌分化.
关键词： 结直肠肿瘤 遗传性非息肉性 DNA错配修复蛋白MutS -
噬菌体展示技术筛选DNA错配修复蛋白MutS高亲和性抗体
目的制备MutS的高亲和抗体,以有利于MutS的检测及应用.方法利用IPTG的诱导作用,在E.coli中诱导表达目标蛋白MutS.利用亲和层析方法获得目标蛋白,并利用凝胶阻滞实验分析其活性.将MutS作为抗原,在Tomlinson抗体库中利用噬菌体展示技术来筛选MutS的高亲和力噬菌粒.将其转化到大肠杆菌后,诱导表达并通过亲和层析的方法来获得可溶性的抗体片段,并检测其亲和力.结果纯化后的MutS具有识别、结合错配DNA双链的活性.ELISA分析表明,利用噬菌体展示技术可获得MutS高亲和力的噬菌粒.将其转化到大肠杆菌HB2151后,诱导表达并纯化到抗体片段,其亲和力为0.9×108 L/mol.结论利用噬菌体展示技术筛选到MutS高亲和力的抗体.
关键词： 噬菌体展示 DNA错配修复蛋白MutS 可溶性抗体片段
