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17β-雌二醇对紧密连接蛋白claudin-6表达及乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响
目的 研究雌激素调控紧密连接蛋白claudin-6表达和对乳腺癌细胞MCF-7细胞生物学行为的影响.方法 用17β-雌二醇(17β-E2)作用MCF-7细胞后,采用RT-PCR和免疫细胞化学法分析claudin-6表达与17β-E2的浓度和时间效应关系;采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测17β-E2对MCF-7细胞增殖的影响;采用细胞划痕法检测17β-E2对MCF-7细胞迁移能力的影响.结果 RT-PCR结果显示,17β-E2能够诱导MCF-7细胞表达claudin-6,其诱导表达具有浓度和时间依赖性,其佳浓度和时间分别为5 nmol/L和24 h;细胞免疫荧光法检测显示,17β-E2组claudin-6主要表达于细胞膜;CCK-8结果显示,5 nmol/L 17β-E2作用24 h可明显抑制MCF-7细胞的生长(P<0.05);细胞划痕实验显示,5 nmol/L 17β-E2作用24 h具有抑制MCF-7细胞迁移的趋势,但差异无统计学意义.结论 17β-E2可以调控claudin-6表达,并具有抑制MCF-7细胞的增殖和迁移的作用.推测17β-E2调控claudin-6表达可能在影响MCF-7细胞生物学行为的过程中发挥一定作用.
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紧密连接蛋白claudin-6在人乳腺癌细胞和组织中的表达及其与乳腺癌淋巴结转移的关系
目的:探讨紧密连接蛋白claudin-6在人乳腺癌细胞株、乳腺癌组织中的表达及与淋巴结转移的关系,为判定乳腺癌淋巴结转移及估计预后提供依据.方法:应用RT-PCR和免疫组织化学S-P法,对人乳腺上皮细胞株HBL-100、低侵袭性乳腺癌细胞株MCF-7、高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-MB231和38例人乳腺癌组织claudin-6的表达进行检测,同时以30例乳腺良性肿瘤作为对照.结果:claudin-6在HBL-100细胞株中有表达,在乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB231中均无表达;乳腺癌组织中claudin-6表达明显低于对照组(P<0.05);claudin-6表达与乳腺癌组织的病理分级及淋巴结转移有关联(P<0.05),与患者年龄和临床分期无关(P>0.05).结论:claudin-6可能在乳腺癌的发生和转移中起一定的负性调控作用,并可作为判断乳腺癌淋巴结转移和估计预后的参考指标.
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干细胞表面分子Claudin-6的结构预测与分析
目的 应用多种手段对干细胞表面分子Claudin-6(CLDN6)进行理化性质和各级结构的预测和分析,探讨CLDN6结构与功能的关系,为CLDN6在再生医学和转化医学上的应用提供理论基础.方法 采用ProtParam工具、InterProScan和TMpred工具分析蛋白质一级结构,采用Consensus Secondary Structure Prediction工具对蛋白质二级结构进行预测,通过RaptorX远程同源建模工具预测蛋白质三级结构.结果 CLDN6是由219个氨基酸组成的蛋白质,相对分子质量为23 387.7,含有4个跨膜结构域,N末端和C末端均位于细胞质中；二级结构预测结果显示,其以α-螺旋和无规则卷曲为主要构件.结论 通过远程同源建模构建了CLDN6蛋白的空间结构,为进一步深入研究CLDN6的功能实现再生医学替代治疗奠定了基础.
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胃癌组织和胃癌细胞株中Claudin-6、CD44V6的表达及其临床意义
目的 研究胃癌组织和胃癌细胞中Claudin-6、CD44V6蛋白的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学及免疫细胞化学法检测Claudin-6及CD44V6蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜、胃腺癌组织及胃癌MKN28、SGC7901、BGC823细胞中的表达.结果 正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃腺癌组织中,Claudin-6的阳性表达率分别为100.0%、65.0%、53.3%,呈明显降低趋势(χ2=7.758,P＜0.05);CD44V6的阳性表达率分别为20.0%、45.0%、77.8%,呈明显增高趋势(χ2=15.917,P＜0.05).肿瘤侵及浆膜层者Claudin-6蛋白的阳性表达率明显低于侵及肌层及以内者(P<0.05);而其CD44V6蛋白的阳性表达率明显高于侵及肌层及以内者(P<0.05).有淋巴结转移者Claudin-6蛋白的阳性表达率明显低于无淋巴结转移者(P<0.05),而其CD44V6蛋白的阳性表达率明显高于无淋巴结转移者(P<0.05).在不同性别、年龄、分化程度及有无脉管侵犯的患者中,Claudin-6和CD44V6蛋白阳性表达率的差异均无统计学意义(P>0.05).Spearman等级相关性分析显示,Claudin-6与CD44V6表达呈负相关(r=-0.986,P＜0.05).在MKN28、SGC7901、BGC823细胞中,Claudin-6和CD44V6免疫染色强度的差异无统计学意义(P>0.05).结论 Claudin-6及CD44V6在胃癌发生、发展中有一定作用,检测Claudin-6及CD44V6的表达有助于判断胃癌患者的病情和预后.
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claudin-6及clusterin在胃癌组织及胃癌细胞株中表达的初步研究
目的:探讨claudin-6及clusterin在胃癌组织及胃癌细胞中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组织化学及免疫细胞化学法检测claudin-6及clusterin在正常胃黏膜、非典型增生胃黏膜、胃癌组织及胃癌细胞株(MKN28、SGC7901、BGC823)中的表达.结果:胃癌组织、非典型增生胃黏膜及正常胃黏膜中claudin-6及clusterin的阳性表达率分别是53.3％、65％、100％及60％、75％、100％,二者的阳性表达率在三组间有统计学差异(均P＜0.05).在不同浸润深度及有无淋巴结转移组内claudin-6及clusterin阳性表达的差异性有统计学意义(P＜0.05),而在不同性别、年龄及脉管侵犯组内无统计学差异(P＞0.05),Spearman等级相关性分析显示claudin-6与clusterin表达呈正相关(r=0.899,P＜0.05).在三株胃癌细胞中claudin-6与clusterin均阳性表达在细胞膜和细胞质中.依分化程度clusterin在MKN28、SGC7901、BGC823三种细胞系中免疫染色强度逐步减弱,claudin-6在三种细胞系中免疫染色强度无明显差别.结论:claudin-6与clusterin的缺失与胃癌发生发展及浸润转移有关,有望成为反映胃癌生物学行为有价值的标志物.
