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食管鳞癌clusterin表达及其临床意义
目的:探讨食管鳞癌组织clusterin表达和单纯手术治疗前后外周血clusterin含量变化与食管鳞癌临床参数的相关性.方法:RT-PCR分析5对食管鳞癌及其远端切缘食管上皮中clusterin基mRNA表达水平;ELISA分析41例单纯手术治疗食管鳞癌患者治疗前后的血清clusterin蛋白表达水平及其与临床特征的相关性.结果:与正常食管上皮相比食管鳞癌组织中clusterin基因表达显著下降或缺失.食管鳞癌患者术前血清中clusterin含量明显低于术后血清含量(3.23 mg/Lvs 25.71 mg/L,P<0.0001).食管鳞癌患者术前血清clusterin含量与肿瘤大小相关(P<0.01),而与年龄、性别、分化程度、肿瘤分期、淋巴结转移.以及总蛋白、白蛋白、血糖、血脂和总胆红素浓度无关(r=-0.1334,-0.1602,0.2413,0.0389,-0.2882,均p>0.05).结论:clusterin基因在食管鳞癌组织中表达明显下调或缺失,血清clusterin含量明显降低,提示在食管鳞状细胞癌中clusterin基因可能具有潜在的抑癌基因作用,动态检测外周血clusterin含量有助于判断食管癌进展.
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Clusterin前导序列抗前列腺癌细胞凋亡作用的研究
目的探讨clusterin前导序列在抗前列腺癌细胞凋亡中的作用.方法培养转染全长clusterin序列的LNCaP细胞(简称A)及缺少前导序列clusterin的LNCaP细胞(简称B)为试验组,培养野生型(简称L)及转染PIRES2-EGFP永久表达载体的LNCaP细胞(简称M)为对照组,RT-PCR法检测4组细胞的clusterin mRNA水平.以TNF-α进行诱导,检测L组细胞clusterin mRNA的变化,MTT及ELISA法检测4组细胞的增殖活性与凋亡情况.结果B、A组细胞clusterin mRNA水平均显著高于L、M组(P均＜0.01);B、A组间差异无显著性意义(P＞0.05).TNF-α作用2 h时,与对照组(A=12 732.0±51.1)相比L组细胞clusterin mRNA有一过性升高(A=15 642.0±64.3),t=-77.106,P＜0.01;12、24 h mRNA显著降低(A=11705.3±30.7,9848.0±67.4,t=24.890,48.020,P均＜0.01);TNF-α作用24 h后,A组细胞存活比例(0.7597±0.0251)显著高于B组细胞(0.6697±0.0185)及对照组(0.6808±0.0222,0.6991±0.0291),P均＜0.01;A组细胞凋亡程度(A=0.3265±0.0387)显著低于B组细胞(A=0.5650±0.0324)及对照组(A=0.5892±0.0418,0.6236±0.0311,P均＜0.05).结论分泌至细胞外间隙的clusterin可发挥抗凋亡作用,而聚集于细胞内的clusterin无抗凋亡作用,前导序列存在是clusterin抗前列腺癌细胞凋亡的前提.
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Clusterin对膀胱癌细胞抗凋亡作用机制的研究
目的 探讨新的抗细胞凋亡因子Clusterin对膀胱癌EJ细胞的作用机制。方法 用丝裂霉素(MMC)诱导膀胱癌EJ细胞凋亡，采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的Clusterin对抗EJ细胞的凋亡率。结果 小剂量Clusterin可以特异性抑制MMC诱导的EJ细胞凋亡作用。结论Clusterin通过抗凋亡机制作用于膀胱癌EJ细胞，可能与膀胱癌细胞的复发、耐药等临床特性有关，此项研究对阐明膀胱癌发生发展的生物学机制以及临床应用Clusterin抗体治疗膀胱癌提供帮助。
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聚集素在前列腺正常、增生、癌组织中的表达及意义
目的通过检测聚集素(Clusterin)在前列腺正常、增生、癌变组织中的表达,探讨其与前列腺疾病发生发展的关系. 方法采用免疫组织化学染色法检测12例正常前列腺组织、15例良性前列腺增生组织(BPH)、56例前列腺癌标本中Clusterin的表达水平. 结果 3种组织中Clusterin的阳性及弱阳性表达率为81%(67/83),其中前列腺正常、增生、癌组织中阳性及弱阳性表达率分别为17%(2/12)、73%(11/15)、96%(54/56).前列腺癌组织中Clusterin表达水平明显高于前列腺正常(t=8.82, P<0.01)及增生(t=7.63, P<0.01)组织,且在癌组织中与肿瘤病理分级(r=0.649, P<0.01)、临床分期(r=0.609,P<0.01)呈正相关. 结论 Clusterin可能通过抗凋亡机制在前列腺癌的生物特性中发挥着重要的作用.
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前列腺癌组织Clusterin与p27及Survivin表达临床意义的研究
目的:探讨凋亡相关蛋白Clusterin、p27和Survivin在前列腺癌组织中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测68例前列腺癌组织和47例前列腺增生组织Clusterin、p27和Survivin蛋白的表达.结果:前列腺癌组织Clusterin、p27和Survivin蛋白的阳性表达率分别为75.0％ (51/68)、72.1％(49/68)和67.6％ (46/68)；前列腺增生组织Clusterin、p27和Survivin蛋白的阳性表达率分别为25.5％(12/47)、19.1％ (9/47)和23.4％ (11/47).Clusterin、p27和Survivin蛋白阳性表达率在前列腺癌组织和前列腺增生组织中差异有统计学意义,P＜0.01.Clusterin、p27和Survivin 蛋白表达与前列腺癌病理分级、临床分期和转移情况具有相关性,P＜0.05.前列腺癌组织Survivin与Clusterin、Survivin与p27的表达呈正相关,P＜0.01.结论:联合检测Clusterin、p27和Survivin蛋白有助于对进展性前列腺癌细胞的侵袭力作出正确评价,以指导临床治疗.
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关键词：
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Clusterin在前列腺癌LNCaP细胞中的抗凋亡作用
目的:探讨Clusterin及其不同功能区域在前列腺癌细胞中的抗凋亡作用.方法:以pIRES2-EGFP质粒为载体,构建含有全长及缺失前导序列(1eader sequence)的Clusterin重组质粒,分别命名为pIRES2-EGFP/cluac、pIRES2-EGFP/clubc.重组质粒转染前列腺癌细胞LNCaP后,以Western blot检测LNCaP细胞及其培养上清液中Clusterin的表达,免疫细胞化学法检测不同功能区域Clusterin在细胞中的分布情况.应用Na2Se03诱导LNCaP细胞凋亡,用流式细胞术(FCM)及荧光显微镜检测Clusterin的抗凋亡作用.结果:在转染pIRES2-EGFP/cluac的LNCaP细胞培养上清及细胞裂解液中均检测到Clusterin的表达,转染pIRES2-EGFP/clubc的LNCaP细胞,仅细胞裂解液中有Clusterin的表达,而培养上清液中未检测到.pIRES2-EGFP/cluac转染细胞中Clusterin在胞浆中呈聚集状态,而pIRES2-EGFP/clubc转染细胞中Clusterin呈弥散分布.FCM及荧光显微镜检测证实,cluac转染对Na2SeO3诱导的LNCaP细胞凋亡有明显的抑制作用.结论:Clusterin有明显的抗前列腺癌细胞凋亡作用,Clusterin前导序列是其发挥抗凋亡作用的必需功能区域.
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Clusterin与Bax在大肠腺癌中的表达及意义
目的：探讨Clusterin（聚集蛋白，CLU）、Bax在大肠腺癌进展过程中的表达情况、作用及其之间的相关性。方法：利用免疫组织化学法检测CLU、Bax蛋白的表达情况，分析其表达结果与临床病理间的关系。结果：CLU在大肠腺癌中的表达明显高于大肠正常黏膜（P＜0.01），表达情况与有无淋巴结转移、浸润程度、Dukes分期及肿瘤组织分化程度呈正相关（P＜0.01），与性别及年龄无关。CLU与Bax的表达呈负相关（r=-0.58，P＜0.01)。结论：CLU高表达与Bax的低表达在大肠腺癌的发生过程中起到重要作用。
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Clusterin与乳腺癌淋巴道转移的相关性研究
目的 考察Clusterin在乳腺癌中的表达情况,以及Clusterin与淋巴道转移的相关性.方法 选取我院2015年6月～2016年6月经病理证实的乳腺癌患者55例,31例乳腺癌良性病例患者,21例癌旁组织3cm作为对照组.免疫组化SP法检测Clusterin和D2-40蛋白表达水平,计算微淋巴管密度.结果 Clusterin主要表达于细胞质;乳腺癌组织中Clusterin阳性率显著高于乳腺良性组织和癌旁组织(P<0.05);乳腺癌组织中MLVD显著高于乳腺良性组织和癌旁组织(P<0.05);出现淋巴结转移的患者Clusterin阳性率高于无淋巴结转移的患者,数据差异具有统计学意义(χ2=7.882,P<0.05).结论 乳腺癌患者Clusterin蛋白表达水平上调,出现淋巴结转移的乳腺癌患者Clusterin表达阳性率上升.
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Clusterin在食管鳞癌组织中的表达异常及意义
目的:通过比较食管癌组织中clusterin表达的变化,探讨其在食管癌发展过程中的意义,并进一步从基因水平探讨clusterin在食管癌组织中表达情况,阐释其变化机制.方法:应用免疫组化方法比较分析不同食管癌组织及正常食管组织中clusterin表达变化:实时聚合酶链反应法检测食管癌及配对正常食管上皮组织中clusterin基因表达情况.结果:正常食管上皮中clusterin全部表达(100%),食管癌组织中clusterin表达显著下降(29.5%),差异有统计学意义(P<0.05):clusterin基因在食管鳞癌组织中也存在缺失/下调,二者相符.结论:Clusterin 表达下调可能与食管癌发展过程中的较早期事件有关.其表达下调与clustrin基因缺失可能有关.
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Clusterin在乳腺浸润性导管癌中的表达与临床特征关系的研究
乳腺癌的发生与细胞增殖和凋亡之间的平衡有着密切关系[1].Clusterin是近年新发现的凋亡相关因子[2],它与乳腺癌关系的研究国内未见报道.本研究检测Clusterin在43例乳腺癌中的表达,分析其与乳腺癌临床特征的关系,以阐明Clusterin在乳腺癌进展中的作用.
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Clusterin与恶性肿瘤的关系研究进展
随着肿瘤患者的持续增多,肿瘤的研究成为当今医学界的热点问题.目前,大量的证据证明肿瘤的发生、发展和转移是多种因素共同作用的结果.许多试验证明,细胞凋亡的调控是肿瘤发生的主要影响因素.而肿瘤细胞凋亡的发生,又与抑凋亡基因表达的增强或促凋亡基因表达受抑制有关.Clusterin是新近发现的重要的凋亡抑制因子,通过其表达量的不同,调节细胞的不断凋亡与增值,从而影响肿瘤的发生和发展.
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Clusterin 蛋白在大肠杆菌中的表达及其多抗制备
目的：在大肠杆菌中表达Clusterin蛋白，并制备其兔抗Clusterin蛋白的多克隆抗体。方法：从MCF-7细胞提取mRNA ，逆转录为cDNA ，以此为模板PCR扩增Clusterin编码基因；将Clusterin编码区cDNA插入的pRSET-A原核表达载体，构建pRSET-A-clusterin ；将重组质粒转化BL21（DE3）感受态细菌，以IPTG诱导6× His-Clusterin融合蛋白的表达，经亲和纯化柱与凝胶柱进行层析纯化。经SDS-PAGE和Western-blot鉴定后，将纯化的融合蛋白与弗氏佐剂混合制备成油包水悬液，常规免疫新西兰大白兔制备多抗，Western-blot检测该抗体识别内源性clusterin的特异性。结果：成功构建了Clusterin蛋白的原核表达载体pRSETA-clusterin ；经表达并纯化的Clusterin蛋白纯度达到98％以上，免疫新西兰大白兔后制备得到了特异性的抗Clusterin的多抗。结论：成功地表达并纯化了Clusterin蛋白，并制备了特异性抗Clusterin多抗。
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Clusterin和Mcm2在大肠肿瘤组织中的表达及其意义
目的:研究调亡抑制蛋白Clusterin和增殖标记物Mcm2在大肠正常组织、大肠腺瘤和大肠癌组织中的表达情况及其与临床病理特征之间的关系.方法:采用免疫组织化学SP染色的方法,选取21例大肠正常组织、34例大肠腺瘤和70例大肠癌组织作为研究对象,分别检测Clusterin和Mcm2在大肠正常组织、大肠腺瘤和大肠癌组织中表达情况,70例大肠癌组织依据性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、浸润程度、病理分型、淋巴结转移、远处转移和Dukes分期进行分组,并分析临床病理因素之间的关系.结果:①Clusterin 和Mcm2在21例正常大肠组织中不表达,34例大肠腺瘤组织中有部分表达,表达率分别为41.18％、17.65％,70例大肠癌标本有大量表达,阳性表达率分别为67.14％、54.29％,表达量在正常大肠黏膜、大肠腺瘤和大肠癌组织中依次增高,并且其表达随肿瘤病理级别的增加而增加,三者之间差异有统计学意义(P＜0.05).②Clusterin和Mcm2蛋白表达与大肠癌患者不同性别、不同年龄段、肿块大小、浸润深度、病理学类型之间无统计学意义(P＞0.05).③Clusterin和Mcm2蛋白表达与大肠肿瘤患者不同分化程度(大肠癌的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级,大肠腺瘤的轻中、重度不典型增生)、有无淋巴结转移组、远处转移组和临床Dukes分期组之间的阳性表达率高于对照组.Clusterin和Mcm2蛋白在大肠癌的高、中、低分化的表达相比差异有统计学意义(P＜0.05),呈逐渐升高趋势.结论:Clusterin和Mcm2在大肠肿瘤组织中呈相关关系(r=0.264,P＜0.05),二者可能在肿瘤的发生发展中发挥重要的抗凋亡和促增殖作用.依据染色的组织结构差异的比较,可以准确区分大肠正常黏膜组织、大肠腺瘤组织和大肠癌组织.Clusterin和Mcm2的表达与大肠肿瘤组织的分级、临床Dukes分期、有无淋巴结转移和远处转移显著相关,可以判断大肠癌的恶性程度高低及腺瘤恶变的可能性.有助于为大肠肿瘤组织的临床诊断、治疗及预后判断提供了新的途径.
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Clusterin在大肠肿瘤组织中的表达及其意义
目的:研究调亡抑制蛋白Clusterin在大肠正常组织、大肠腺瘤和大肠癌组织中的表达情况差异及其与临床病理特征之间的关系.方法:采用免疫组织化学SP染色的方法,选取21例大肠正常组织、34例大肠腺瘤和70例大肠癌组织作为研究对象,检测Clusterin在大肠正常组织、大肠腺瘤和大肠癌组织中表达情况,70例大肠癌组织依据性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、浸润程度、病理分型、淋巴结转移,远处转移和Dukes分期进行分组,并分析临床病理因素之间的关系.结果:①Clusterin在21例正常大肠组织中不表达,34例大肠腺瘤组织中有部分表达,表达率为41.18％,70例大肠癌标本有大量表达,阳性表达率为67.14％,表达量在正常大肠黏膜、大肠腺瘤和大肠癌组织中依次增高,并且其表达随肿瘤病理级别的增加而增加,三者之间差异有统计学意义(P＜0.05).②Clusterin表达与大肠癌患者不同性别、不同年龄段、肿块大小、浸润深度、病理学类型之间差异无统计学意义(P＞0.05).③Clusterin表达与大肠肿瘤患者不同分化程度(大肠癌的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级,大肠腺瘤的轻中、重度不典型增生)、有无淋巴结转移组、远处转移组和临床Dukes分期组之间的阳性表达率高于对照组.Clusterin在大肠癌的高、中、低分化的表达相比差异有统计学意义(P＜0.05),呈逐渐升高趋势.结论:Clusterin在肿瘤的发生发展中发挥重要的抗凋亡作用.依据染色的组织结构差异的比较,可以准确区分大肠正常黏膜组织、大肠腺瘤组织和大肠癌组织.Clusterin的表达与大肠肿瘤组织的分级、临床Dukes分期、有无淋巴结转移和远处转移显著相关,可以判断大肠癌的恶性程度高低及腺瘤恶变的可能性.有助于为大肠肿瘤组织的临床诊断、治疗及预后判断提供了新的途径.
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细胞减灭术联合腹腔灌注热化疗对卵巢癌患者免疫功能及血浆clusterin、septin-9蛋白表达的影响
目的 探讨细胞减灭术(CRS)联合腹腔灌注热化疗对卵巢癌患者免疫功能及血浆clusterin、septin-9表达的影响,并分析产生该效果可能的机制.方法 选取2013年1月-2016年10月丹阳市人民医院收治的106例晚期卵巢癌患者为研究对象,依据随机数字表法分为观察组和对照组,每组各53例.两组患者均在检查无手术禁忌证情况下行CRS,观察组在术后行腹腔热灌注化疗.两组患者分别于术前及术后30 d抽取静脉血,行免疫功能(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及血浆cltus-terin、septin-9水平测定,并在术后30 d对所有患者的疗效进行评价,统计并发症的发生情况.结果 观察组治疗总有效率显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).两组患者术后30 d CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平显著升高,CD8+水平显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);且观察组变化更为显著,差异有统计学意义(P＜0.05).两组患者术后30 d血浆clusterin、sep-tin-9表达水平显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);且观察组降低更为明显,差异有统计学意义(P＜0.05).观察组总并发症发生率高于对照组,但两组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CRS联合腹腔热灌注化疗治疗卵巢癌效果良好,安全性高,有助于提高患者免疫功能,降低血浆clusterin、septin-9表达,抑制肿瘤增殖和转移.
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番茄红素及维生素E对燃煤型氟中毒致大鼠睾丸组织中Clusterin蛋白表达的影响及机制
目的 研究番茄红素及维生素E对燃煤型氟中毒致大鼠睾丸组织中Clusterin蛋白表达的影响及机制.方法 60只雄性SD大鼠分为低、中、高氟组、高氟+维生素E组、高氟+番茄红素组和对照组,每组10只.染毒组喂饲含不同比例的燃煤型氟中毒病区煤烘玉米的饲料,构建燃煤型氟中毒动物模型,高氟+维生素E组和高氟+番茄红素组分别喂饲添加维生素E和番茄红素的病区煤烘玉米配制饲料,对照组给予正常饲料.观察各组大鼠氟斑牙情况;氟离子选择电极法检测大鼠尿和睾丸组织氟含量;HE染色光镜下观察睾丸组织病理学改变;原位缺口末端标记(TUNEL)染色观察生精细胞凋亡情况;免疫组化法检测大鼠睾丸组织中Clusterin蛋白表达.结果 与对照组相比,低、中、高氟组大鼠氟斑牙严重程度、尿氟及睾丸组织氟含量、睾丸组织病理学损伤程度和睾丸组织生精细胞凋亡指数均依次增加(P＜0.05),各氟剂量组上述指标随氟剂量的增大而增大;与高氟组相比,高氟+维生素E组和高氟+番茄红素组上述指标明显降低;与对照组相比,低、中、高氟组大鼠Clusterin蛋白水平依次下降(P＜0.05),各氟剂量组Clusterin蛋白表达水平随氟剂量的增大而下降.与高氟组相比,高氟+维生素E组和高氟+番茄红素组Clusterin蛋白水平明显升高.结论 燃煤型氟中毒可引起大鼠睾丸组织的性生殖损害,生精细胞凋亡率增加,Clusterin蛋白的表达降低.抗氧化剂可显著降低生殖细胞凋亡率,提高Clusterin蛋白的表达,改善雄性生殖功能的损伤.
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Clusterin 在肺癌中的表达及意义
目的：通过观察Clusterin在肺癌中的表达，分析其表达情况与病理类型、分化程度和淋巴结转移等的相关性。方法应用免疫组织化学染色法检测Clusterin在16例鳞癌、22例腺癌、10例小细胞癌病理组织切片和10例正常肺组织标本中的表达水平。结果正常肺组织无明显Clusterin表达；小细胞癌中仅见间质细胞偶有表达，肿瘤细胞几乎无表达；非小细胞癌Clusterin 表达较高，其中鳞癌阳性表达率为75.0％，腺癌阳性表达率为68.2％。非小细胞肺癌标本中，中低分化表达明显高于高分化（P＜0.05）；转移表达病例明显高于非转移组（Ρ＜0.05）。结论 Clusterin的表达与肺腺癌和肺鳞癌的发生和发展有密切关系。
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Clusterin和p21在膀胱癌中的表达及临床意义
目的:研究Clusterin和p21基因在膀胱癌中的表达和临床意义及二者的相关性.方法:采用免疫组织化学检测20例正常膀胱组织(NB)、60例膀胱癌组织(BTCC)中Clusterin和p21蛋白的表达情况,根据染色强度和阳性细胞数作半定量分析.结果:Clus-terin、p21蛋白在膀胱癌中的阳性表达率明显高于正常膀胱组织,阳性表达率分别为70.0%、63.3%;20.0%、15.0%(P<0.05);二者在低分化、浸润性肿瘤的阳性表达率明显高于高分化、浅表性肿瘤(P<0.05),Clusterin和p21在膀胱癌中的表达存在正性相关(P<0.05).结论:Clusterin、p21蛋白的表达与膀胱癌病理组织学分级、临床分期相关,二者联合检测可为膀胱癌的诊断及预后提供一定参考价值.
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Clusterin、Caspase-3在胃癌中的表达及其相关性研究
目的:通过检测胃癌组织、正常胃黏膜组织中Clusterin及Caspase-3的表达情况,探讨二者与胃癌发生、发展的关系及二者的相关性.方法:运用蛋白质印迹法和免疫组化SP法检测这两个蛋白在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达情况.结果:免疫组化SP法结果显示,在胃癌组织及正常胃黏膜组织中,Clusterin的表达阳性率分别为78.0％、26.0％,Clusterin在胃癌中高表达,并显著高正常胃黏膜的表达(P＜0.05);Caspase-3的表达阳性率分别为24.0％、78.0％,Caspase-3在胃癌组织中低表达,显著低于正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P＜0.05);Caspase-3和Clusterin的蛋白表达与胃癌的组织学分型、TNM分型、淋巴结转移以及胃癌浸润深度有紧密的联系(P＜0.05).Spearman等级相关分析发现在胃癌组织中Clusterin和Caspase-3的表达呈负相关(P＜0.05).结论:Clusterin和Caspase-3与胃癌的发生、发展关系密切,可能是胃癌诊断及治疗研究的新方向.
