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Clusterin抗原的表达、抗体制备及其初步鉴定
目的:制备Clusterin(CLU)多克隆和单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定.方法:以成人肝cDNA表达文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CLU和PET-32a-CLU.GST-CLU融合蛋白在大肠杆菌中表达,被作为免疫原制备兔多抗和鼠mAb.采用ELISA法和Western blot鉴定抗CLU抗血清在重组蛋白和天然蛋白中的特异性.采用Western blot,间接免疫荧光,免疫组化鉴定mAb的特异性.结果:GST-CLU融合蛋白在相对分子质量(Mr)约54 000处呈现明显表达条带.Western blot鉴定表明,制备的抗CLU兔多克隆抗体可特异地识别成人肝总蛋白中Mr约52 000和58 000的CLU蛋白.获得9株可稳定分泌抗CLU的杂交瘤细胞株可识别重组人CLU蛋白,其中有2株可特异性结合HepG2细胞质中的蛋白,4株可特异性结合成人肝脏组织肝细胞质中的蛋白.结论:成功地制备出兔抗人CLU抗血清和9株抗CLU的mAb,为进一步研究CLU在肿瘤中的功能奠定了实验基础.
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前列腺癌组织Clusterin与Survivin表达临床意义的研究
目的:检测凋亡相关蛋白Clusterin、Survivin在前列腺癌(PCa)中的表达及相关性研究.方法:应用免疫组织化学方法检测68例前列腺癌组织和47例前列腺增生组织Clusterin、Survivin蛋白的表达.结果:前列腺癌组织中Clusterin、Survivin蛋白的阳性表达率分别75.0％(51/68)、67.6％(46/68),前列腺增生组织中Clusterin、Survivin蛋白的阳性表达率分别为19.1％ (9/47)、25.5％ (12/47).Clusterin和Survivin蛋白阳性表达率在前列腺癌组织和前列腺增生组织中差异具有统计学意义(P＜0.01).Clusterin和Survivin蛋白表达与前列腺癌病理分级、临床分期和转移情况具有相关性(P＜0.05),前列腺癌组织中Survivin与Clusterin的表达呈正相关(P＜0.01).结论:联合检测Clusterin和Survivin蛋白,有助于对进展性前列腺癌细胞的侵袭力作出正确评价,以指导临床治疗.
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claudin-6及clusterin在胃癌组织及胃癌细胞株中表达的初步研究
目的:探讨claudin-6及clusterin在胃癌组织及胃癌细胞中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组织化学及免疫细胞化学法检测claudin-6及clusterin在正常胃黏膜、非典型增生胃黏膜、胃癌组织及胃癌细胞株(MKN28、SGC7901、BGC823)中的表达.结果:胃癌组织、非典型增生胃黏膜及正常胃黏膜中claudin-6及clusterin的阳性表达率分别是53.3％、65％、100％及60％、75％、100％,二者的阳性表达率在三组间有统计学差异(均P＜0.05).在不同浸润深度及有无淋巴结转移组内claudin-6及clusterin阳性表达的差异性有统计学意义(P＜0.05),而在不同性别、年龄及脉管侵犯组内无统计学差异(P＞0.05),Spearman等级相关性分析显示claudin-6与clusterin表达呈正相关(r=0.899,P＜0.05).在三株胃癌细胞中claudin-6与clusterin均阳性表达在细胞膜和细胞质中.依分化程度clusterin在MKN28、SGC7901、BGC823三种细胞系中免疫染色强度逐步减弱,claudin-6在三种细胞系中免疫染色强度无明显差别.结论:claudin-6与clusterin的缺失与胃癌发生发展及浸润转移有关,有望成为反映胃癌生物学行为有价值的标志物.
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前列腺癌组织Clusterin与Survivin表达与PSA 的相关性分析
目的：分析蛋白Clusterin和Survivin在前列腺癌（ PCa）组织中的表达与前列腺特异性抗原（ PSA）的相关性及在前列腺癌诊断中的应用价值。方法：应用免疫组织化学方法检测80例前列腺癌和50例前列腺增生组织凋亡蛋白 Clusterin、Survivin的表达和相应患者血浆中PSA值。结果：前列腺癌组织中Clusterin、Sur-vivin蛋白的阳性表达率分别为57.5%（46/80）、48.8%（39/80），Clusterin和Survivin蛋白在前列腺增生组织中的阳性表达率分别为0（0/50）、0（0/50），差异具有统计学意义（ p<0.05）。Clusterin和Survivin蛋白表达与前列腺癌病理分级、临床分期、转移情况和PSA具有相关性（p<0.05），前列腺癌组织中Survivin与Clus-terin 的表达无相关性（ p>0.001）。结论：联合检测Clusterin及Survivin表达与前列腺特异抗原（ PSA）可为前列腺癌的防治和治疗提供新的思路。
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前列腺癌组织 p27和 Clusterin 与前列腺特异性抗原的相关性分析
目的：分析蛋白 p27和 Clusterin 在前列腺癌（PCa）组织中的阳性表达与前列腺特异性抗原（ PSA）的相关性。方法：应用免疫组化法检测75例 PCa 和50例前列腺增生组织凋亡蛋白 p27、Clusterin 蛋白的表达和相应患者血浆中 PSA 值。结果：PCa 组织中 p27、Clusterin 蛋白的阳性表达率分别64.0％（48/75）、37.3％（28/75），p27和 Clusterin 蛋白在前列腺增生组织中的阳性表达率分别70.0％（35/50）、0（0/50），二者阳性表达率差异具有统计学意义（P ＜0.05）。p27和 Clusterin 蛋白表达与 PCa 病理分级、临床分期、转移情况和 PSA值具有相关性（P ＜0.05），PCa 组织中 Clusterin 与 p27的表达无相关性（P ＞0.001）。结论：临床中联合检测p27及 Clusterin 表达与前列腺特异抗原（PSA）关系有助于前列腺癌诊治。
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Clusterin、E-cadherin在宫颈鳞癌组织中的表达及其相关性分析
目的 探讨Clusterin和E-cadherin在宫颈鳞癌组织中的表达及其相关性.方法 采用免疫组织化学染色法,检测18例正常宫颈组织、32例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织以及40例宫颈鳞状细胞癌(CSC)组织中Clusterin和E-cadherin的表达.结果 3组患者的基线资料差异无统计学意义.宫颈鳞癌、CIN2、CIN3中Clusterin的表达均高于正常宫颈组织(P<0.05).Clusterin在 Ⅰ 级宫颈鳞癌中的表达低于 Ⅲ 级(P<0.01),并与临床分期有关(P<0.05),而与淋巴结转移、癌灶浸润间质深度无关(P>0.05).E-cadherin在宫颈鳞癌及CIN2、CIN3中的表达均低于正常宫颈组织(P<0.05).E-cadherin在Ⅰ级、Ⅱ级宫颈鳞癌中的表达均高于Ⅲ级(P<0.05),并与淋巴结转移有关(P<0.05),而与临床分期、癌灶浸润间质深度无关(P>0.05).宫颈鳞癌组织中Clusterin和E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.339,P<0.05).结论 Clusterin的高表达与E-cadherin的低表达可能与宫颈鳞癌的发生有关,联合检测二者的表达可能对宫颈鳞癌的早期诊断具有潜在的临床价值.
