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突变型乙肝病毒前C-C基因疫苗免疫BALB/C小鼠的研究
目的 了解乙肝病毒前C-C基因疫苗(VEC)的突变型VE2、VE4免疫BALB/c小鼠后诱发特异性体液和细胞免疫的效果.方法 分别用突变型和非突变型DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠抗HBc、抗HBelgG,免疫第28天取小鼠脾细胞用酶免疫斑点(ELISPOt)方法和CTL杀伤试验检测特异性细胞免疫功能.结果 VE2、VFA组抗HBe水平高于VEC组,抗HBc水平差异无统计学意义.3种质粒均能引发特异性细胞免疫反应,VE4、VE2强于VEC;联用VM7免疫后能使VEC、VE2、VE4特异性细胞免疫反应增强.结论 突变型前C-C基因疫苗在诱导BALB/c小鼠特异性体液和细胞免疫方面优于突变前.γ干扰素基因可作为基因佐剂增强HBV DNA疫苗诱导的特异性细胞免疫反应.
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突变型HBV前C-C基因疫苗的构建及真核细胞表达
目的 采用点突变技术对HBV前C-C基因中的蛋白酶切位点进行4处点突变,构建突变型HBV前C-C/ENH Ⅱ重组基因疫苗,转染HepG2细胞,研究其在真核细胞内的表达情况.方法 采用单引物二次PCR法对质粒VEC依次进行基因点突变,得到151+154(VE2)、151+154+164+167点突变(VE4)2种突变型疫苗,转染HepG2细胞,通过细胞免疫化学、酶联免疫分析、免疫印迹等方法 检测其在HepG2细胞内的表达情况及表达产物的分子量.结果 VEC、VE2、VE4转染HepG2细胞均胞浆表达目的 蛋白,产物分子量分别为18、20、22 kD,细胞裂解液的HBeAg含量VE4、VE2高于VEC,上清中则反之.结论 突变型HBV前C-C基因疫苗VE2、VE4构建成功并表达预期病毒前C蛋白前体.