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G1型轮状病毒中和抗原VP7基因变异特点
目的研究我国G1型轮状病毒主要中和抗原VP7基因的变异特点.方法对1988～1998年收集自北京、沈阳、新乡、上海、深圳、广州、重庆等7个城市的23份G1型轮状病毒毒株VP7 cDNA序列进行测定,并结合核酸电泳带型和G1型单抗的ELISA检测结果分析VP7基因的变异特点.结果我国G1型轮状病毒VP7变异有一定规律,主要集中在aa41、49、57、65、68、74、94、97、147、170、217、218、268、281、291,即VR3～5、VR7～8以及多肽C端的部分区域内.各地区之间没有明显差别,虽然随时间不同个别氨基酸可能发生替换,但仍同属Jpn-417支系;aa91位可能参与构成G1型VP7的抗原表位,某些位点的氨基酸变异可能与核酸带型改变有关.结论在研制疫苗时,应采用基因和抗原性具有代表性的近期毒株,同时定期监测抗原性的改变.
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北京地区儿童EB病毒感染的血清学调查
目的 了解北京地区儿童EB病毒感染现状.方法 选取北京地区0～14岁儿童的血清589份,应用微润赛润ELISA classic EBV VCA IgG试剂盒,在波长405 nm下检测血清样品的吸光度值.参照试剂盒内专用的标准曲线和临界值判定血清样品EB病毒感染与否.根据专用公式计算EBV VCA IgG抗体活性.利用统计学软件SPSS 13.0分析比较北京城区和农村儿童EBV感染阳性百分率及EBV VCA IgG抗体强度.结果 血清学检测显示北京地区0～14岁儿童EBV感染阳性率为83.6%,其中城市为80.8%,农村为86.2%.EBV感染高峰集中在3岁之前为71%,其中城市为67.7%低于农村75.3%,6岁之前为82.5%.统计学分析比较城市和农村儿童不同年龄的EBV感染阳性百分率和EBV VCA IgG抗体活性具有显著差异.结论 北京城区儿童6岁之前EBV感染阳性百分率有所降低,部分儿童初次感染年龄向后推移.
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病毒蛋白22增强单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦基因治疗系统杀伤卵巢癌细胞的体内研究
目的探讨病毒蛋白22(VP22)的细胞间传递作用,以及其促进单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK )/更昔洛韦(GCV)基因治疗系统对卵巢癌移植瘤细胞的体内杀伤效应.方法用慢病毒感染卵巢癌3AO细胞,形成携带HSV-TK基因的3AO细胞(3AO/TK)及携带HSV-VP22-TK融合基因的3AO细胞(3AO/VP22-TK).分别在裸鼠皮下接种10%含卵巢癌3AO/TK(3AO/TK组)或3AO/VP22-TK(3AO/VP22-TK组)的混合细胞,并以接种单纯3AO细胞裸鼠为对照(3AO组),每组裸鼠10只.当肿瘤体积达150 mm3后,分别于腹腔注射GCV 10 mg/kg、50 mg/kg.结果注射10 mg/kg GCV后,3AO/TK组与3AO/VP22-TK组肿瘤体积、重量比较,差异有极显著性(P<0.01),3AO/VP22-TK组肿瘤生长明显受到抑制;注射50 mg/kg GCV后,两组肿瘤体积、重量比较,差异无显著性(P>0.05).注射GCV 10 mg/kg后,3AO/TK组肿瘤抑制率为37.7%,3AO/VP22-TK组肿瘤抑制率为91.5%,两组比较,差异有极显著性(P<0.01);注射GCV 50 mg/kg后,3AO/TK组肿瘤抑制率为81.8%,3AO/VP22-TK组肿瘤抑制率为96.7%,两组比较,差异无显著性(P>0.05).结论 VP22介导的自杀基因产物细胞间扩散作用,可明显加强对体内肿瘤细胞的杀伤效应.
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类风湿关节炎患者血清EB病毒衣壳抗原IgA抗体的临床应用
类风湿关节炎(RA)是一种常见的风湿性疾病,目前认为其发病与遗传、免疫及环境因素有关.在环境因素中,病毒感染可能是RA发病的一种触发因素[1].EB病毒与RA的发病关系一直是临床关注的焦点.本研究应用酶联免疫捕获法检测RA患者血清中EB病毒衣壳抗原IgA抗体(VCA-IgA),以期了解EB病毒感染与RA的关系,为RA的诊断及进一步的病因研究提供一定的线索.
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衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1在D型沙眼衣原体外膜中结合位点的检测
目的 发现噬菌体phiCPG1衣壳蛋白 Vp1在沙眼衣原体中的结合位点,为理解噬菌体与衣原体的相互作用提供线索.方法 诱导表达噬菌体phiCPG1的衣壳蛋白Vp1,通过胶回收进行目的蛋白的纯化,复性后以Far-Western印迹技术检测Vp1是否能与衣原体外膜中重组多形外膜蛋白(rPmp)家族及主要外膜蛋白(MOMP)结合.结果 在大肠埃希菌中成功表达蛋白Vp1;抗Vp1的单克隆抗体作为一抗进行Western印迹,结果无特异性条带出现,可见针对Vp1的单克隆抗体不与任何一种rPmp结合.Far-Western印迹结果显示,在rPmpI的位置出现明显的条带,在相对于其他rPmp和MOMP的位置无特异性条带的出现,证实Vp1能特异结合D型沙眼衣原体标准株的外膜蛋白rPmpI.结论 沙眼农原体外膜中有Vp1的结合位点,可能通过和rPmpI的结合从而特异性地与沙眼农原体结合.
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真菌提取物JN219抗轮状病毒机制的研究
目的 探讨真菌提取物JN219抑制轮状病毒(RV)入侵宿主细胞的机制.方法 构建原核表达载体pET-30a-VP4,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达并用His抗体镍柱亲和层析纯化病毒外壳蛋白VP4,利用体外竞争抑制RV-MA104细胞感染模型,观察与VP4共孵育后含JN219提取物抑制RV活性的变化.结果构建的pET-30a-VP4载体可表达VP4重组蛋白(约88 kD),镍柱纯化的VP4蛋白含量为0.75 mg/ml,与VP4作用后JN219提取物抗病毒指数由36.7降低为9.1,半数有效浓度由(0.163±0.02)mg/ml升为(0.702±0.13)mg/ml,半数中毒浓度由5.99 mg/ml升至6.38 mg/ml,P均＜0.05.结论 与病毒外壳蛋白VP4结合,进而阻断病毒穿入细胞可能是JN219抗RV的主要机制之一.
关键词： 真菌提取物JN219 病毒壳体 抗轮状病毒机制 -
乙型肝炎病毒S区蛋白肝癌细胞株的稳定表达
构建了乙肝病毒S区不同蛋白的重组真核表达质粒pcLS2、pcLS4,并转染肝癌细胞株HepG2.转染细胞经新霉素筛选后,获得稳定表达S区不同蛋白的细胞株.Westemblotting可分别检测到相对分子质量为39 000的大蛋白及24 000的主蛋白在pcLS2、pcLS4稳定转染的细胞中表达.免疫组化实验显示这些蛋白均主要呈细胞质分布.
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乙型肝炎病毒C区蛋白在肝癌细胞株中的表达
用PCR法获得编码乙型肝炎病毒C区不同蛋白的基因,利用基因重组技术构建表达这些蛋白的真核表达载体,并在高分化肝癌细胞株HepG2中进行了稳定表达.
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鼻咽癌患者血清EB病毒DNA片段的检出及临床意义
目的: 探讨鼻咽癌患者血清Epstein-Barr病毒(EBV)DNA片段检出率及其和EBV衣壳抗原IgA类抗体(VCA/IgA)的关系.方法: 聚合酶链反应(PCR)加限制性内切酶酶切技术检测疱疹病毒的DNA, 酶免疫组化技术检测 EBV VCA/IgA抗体. 结果: 33例鼻咽癌患者中, 抗体阳性率88%, DNA阳性率55%;对照组120例, 仅1例检出EBV DNA片段.鼻咽癌患者中EBV DNA片段的检出率显著性高于对照组,但EBV DNA片段的检出率低于EBV VCA/IgA抗体的检出率.结论: 进一步证实EBV与鼻咽癌有密切关系;EBV DNA片段及EBV VCA/IgA抗体检测,有利于鼻咽癌的辅助诊断.
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汉坦病毒核衣壳蛋白抗原多肽片段的合成与应用
目的以合成肽为抗原建立新型特异性检测抗汉坦病毒IgG和IgM的ELISA. 方法用多肽合成仪合成汉坦病毒核衣壳蛋白（aa17-66）50个氨基酸残基的核心序列，以此为抗原，通过实验发现这一序列具有较强的抗原性，首次建立了以合成肽为抗原的新型特异性检测抗汉坦病毒IgG和IgM的ELISA. 测定肾综合征出血热(HFRS)患者血清23份，乙型肝炎患者血清9份，正常人血清11份. 结果乙型肝炎患者血清和正常人血清均为阴性，20份HFRS 血清IgG阳性，21份HFRS血清IgM阳性. 本方法的相对敏感性为86%和91%，相对特异性为100%，符合率为93%和95%. 结论本法特异性强，灵敏度高，简便易行，是适于基层医疗单位的诊断方法.
