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SENP1在人神经胶质瘤细胞中的重要作用
目的 探讨小泛素相关修饰物(SUMO)特异性蛋白酶-1(SENP1)对神经胶质瘤细胞的生长和侵袭能力的影响.方法 采用腺病毒感染方法敲除胶质瘤细胞LN229的SENP1基因,然后用双染法检测基因敲除后对细胞增殖和细胞凋亡的影响,并用Tanswell小室法检测基因敲除后胶质瘤细胞迁移能力的改变.结果 敲除SENP1后的LN229细胞增殖与对照组相比明显被抑制,双染实验发现SENP1敲除可以促进肿瘤细胞凋亡.且进一步功能实验表明SENP1敲除后的肿瘤细胞的迁移能力明显下降.结论 SENP1可以促进细胞增殖,降低细胞凋亡率,并影响肿瘤细胞侵袭基因的表达,在神经胶质瘤发病和进展过程中发挥着十分重要的作用.
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腺病毒介导高血压相关基因转移对兔颈动脉球囊损伤后新生内膜形成的抑制作用
目的探讨腺病毒载体介导的新基因高血压相关基因(Hypertension-related gene,HRG-1)转移对兔颈总动脉球囊损伤后新生内膜形成的影响.方法兔颈总动脉球囊损伤后,经血管腔内转染含有HRG-1的腺病毒载体(AdHRG-1)或含有绿色荧光蛋白报告基因的空载腺病毒载体(AdGFP),以生理盐水处理为对照.于术后3、7和28 d取材,分别进行外源基因表达检测、PCNA染色和定量组织形态学分析.结果应用逆转录-聚合酶链反应和免疫组织化学方法分别证实了基因转移后3 d HRG-1在兔颈动脉壁内的表达;PCNA免疫组织化学染色显示,转染AdHRG-1后7 d兔颈动脉内膜和中膜PCNA阳性细胞指数较转染AdGFP组明显降低[(21.4±2.5)% 对(45.6±3.8)%,(6.4±1.1)% 对(17.8±1.9)%,P<0.05].基因转移后28 d血管壁定量组织形态学分析显示,转染AdHRG-1组血管新生内膜面积及内膜面积与中膜面积比均显著低于转染AdGFP组[(0.13±0.03)mm2 对 (0.45±0.14)mm2,0.19±0.02对0.70±0.15,P<0.01],血管腔面积则显著增加[(0.88±0.07)mm2 对(0.57±0.27)mm2,P<0.01],而转染AdGFP组与生理盐水处理组间无显著性差异.结论以腺病毒为载体经血管腔内转染HRG-1可有效抑制球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖和新生内膜形成.
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检测黑猩猩腺病毒68型抗原的双抗体夹心ELISA的建立
目的 建立定量黑猩猩腺病毒68型(chimpanzee adenovirus type 68,AdC68)含量的双抗体夹心ELISA,并验证其可行性.方法 用表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的非复制型AdC68(AdC68GFP)感染HEK293细胞,收获病变细胞并进行超速离心纯化AdC68GFP.用纯化AdC68GFP免疫家兔制备抗AdC68GFP抗体.以抗AdC68GFP抗体为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的抗腺病毒HEXON IgG为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA,确定该法的线性范围,并验证该法的准确度、精密度、专属性和适用性.结果 纯化AdC68GFP的蛋白浓度为38.8 μg/ml,其中HEK293细胞蛋白浓度低于0.3 μg/ml.双抗体夹心ELISA的适包被抗体和酶标抗体浓度分别为1∶50和1∶500.该法的线性范围为0.06～3.88 μg/ml,线性相关系数为0.999 6.高、低浓度AdC68GFP样品的回收率分别为93.17％和94.33％,变异系数分别为6.72％和3.44％.该法可特异性检测AdC68GFP抗原,未发现与HEK293细胞蛋白发生交叉反应.应用该法检测AdC68GFP纯化过程中的样品可反映病毒的纯化效果.结论 建立的双抗体夹心ELISA具有良好的准确度、精密度和专属性,可用于AdC68纯化工艺过程中对病毒蛋白含量的快速检测.
