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利用光镜-电镜关联方法研究发热伴血小板减少综合征病毒核蛋白的亚细胞定位
目的 通过miniSOG蛋白标记技术观察发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)核蛋白NP在不同时相下的细胞内定位及特点.方法 miniSOG是新发现的能够被电子显微镜解析的蛋白标签.通过PCR方法克隆SFTSV核蛋白NP与miniSOG融合基因NPSOG,将其构建至真核表达载体,转染细胞;之后对不同转染时相的细胞进行原位固定、光氧化、制备超薄切片,用电镜观察细胞内NPSOG蛋白的表达及分布特点.结果 携带NPSOG基因的质粒转染细胞后,核蛋白NP在胞浆及核周表达,并逐渐聚集,连接内质网、高尔基体等细胞器在胞浆中形成体积较大、形状不规则的包涵体样结构,未见其他亚细胞结构改变.结论 SFTSV核蛋白NP单独表达即可形成包涵体,无需其他病毒蛋白协助;包涵体的形成需要一定数量蛋白的定向移动并聚集,这期间可能涉及蛋白与宿主细胞器的相互作用.
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羊及其体表蜱中SFTSV的分离培养与全基因序列分析
目的 调查2012年春季江苏省某县羊及其体表蜱中发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)感染情况,并对分离到的毒株进行全基因序列分析.方法 采用荧光定量RT-PCR法对标本进行SFTSV核酸检测,所有阳性标本进行病毒分离并测序,序列结果用Lasergene和MEGA4软件进行拼接和分析.结果 7只羊和从羊体上采集的93只长角血蜱中,1只羊的血清和淋巴结SFTSV核酸检测呈阳性,附着于该羊体表的1只长角血蜱病毒核酸也呈阳性,通过病毒分离获得2株SFTSV毒株,JS2012-yang01(羊)和JS2012-pi01(蜱).序列分析结果显示,JS2012-yang01和JS2012-pi01的L、M和S基因片段的核苷酸同源性分别为99.8％ 、99.8％ 、100.0％,氨基酸同源性分别为99.6％ 、99.6％、100.0％,进化树分析显示两株病毒处于同一亚分支.2株毒株与中国其他地区流行的SFTSV毒株核苷酸序列同源性介于95.9％～～ 99.6％(L基因),94.7％～～99.5％(M基因)和95.0％～99.5％(S基因),与布尼亚病毒科白蛉病毒属其他毒株序列差异较大.结论 该调查中分离自羊和蜱的SFTSV高度同源.蜱虫通过叮咬吸血,可能在SFTSV从动物到人的传播过程中起媒介作用.
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严重发热伴血小板减少综合征病毒核蛋白核酸疫苗的构建及免疫原性研究
目的:构建SFTSV的核蛋白核酸疫苗并探讨其免疫原性.方法:采用PCR方法扩增SFTSV核蛋白基因,并用引物引入限制性内切酶酶切位点,克隆入载体pJW4303.经酶切和测序鉴定正确的质粒,用PEI瞬时转染HEK293T细胞,用免疫印迹法鉴定核蛋白的表达.同时以质粒pJW4303作为阴性对照,免疫BALB/c小鼠,酶联免疫法验证其免疫原性.结果:成功构建质粒pJW4303-N,经Western blot证实SFTSV核蛋白能够在HEK293T细胞中表达.ELISA检测免疫后小鼠血清特异性IgG抗体及其亚型发现,IgG抗体及其亚型较免疫前明显升高,亚型中以IgG2a升高为主.结论:SFTSV核蛋白核酸疫苗pJW4303-N具有良好的免疫原性,为进一步研究SFTSV核蛋白奠定了基础.
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SFTSV糖蛋白Gn重组质粒的构建及其体液免疫原性研究
目的:研究严重发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)糖蛋白Gn的体液免疫原性.方法:将PCR方法扩增的SFTSV糖蛋白Gn基因和密码子优化后Gn基因克隆入载体pJW4303,构建Gn野生型和双优化重组质粒;经酶切和测序鉴定确认为目的质粒后,分别转染HEK293T细胞,Western blot检测糖蛋白Gn的表达;用Gn重组表达质粒及空载体分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测免疫后小鼠血清抗Gn特异性IgG抗体.结果:成功构建Gn重组野生型质粒pJW4303-WSP-Gn和双优化质粒pJW4303-tPA-Gn-opt;Western blot证实pJW4303-WSP-Gn编码Gn可在HEK293T细胞内表达,pJW4303-tPA-Gn-opt编码Gn在HEK293T细胞内表达并分泌到细胞外;ELISA检测免疫后小鼠血清抗Gn特异性IgG抗体证实各重组质粒均能诱导特异性IgG抗体产生,双优化质粒较野生型质粒诱导产生的IgG时间更早、滴度更高.结论:SFTSV的糖蛋白Gn具有良好的免疫原性;和野生型质粒相比,双优化质粒更有利于糖蛋白Gn的表达和分泌,并且具有更好的体液免疫原性.
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蓬莱市发热伴血小板减少综合征监测分析
目的 研究蓬莱市发热伴血小板减少综合征(简写SFTS)流行病学特征和感染状况,为制定防控策略提供科学依据. 方法 对2010-2013年蓬莱市发热伴血小板减少综合征病例采用描述性流行病学方法,分析其流行病学特点,用间接法ELISA对病例地区1 525名蓬莱市民的血清进行SFTSV-IgG抗体检测,采集病例地区动物宿主血清标本通过双抗原夹心法ELISA进行SFTSV的总抗体检测,通过Realtime RT-PCR进行SFTSV的核酸检测. 结果 2010-2013年蓬莱市发热伴血小板减少综合征病年均发病率为4.55/10万,死亡率0.89/10万,病死率为19.51％,病例覆盖全市9.57％村社区,病例以农民为主,6-9月为高发季节,年龄以40～79岁为主.蓬莱市健康人群SFTSV-IgG阳性率为9.05％,动物宿主牛、羊、跑山鸡、狗、猪和圈养鸡、抗体阳性率分别为63.86％、44.76％、42.31％、31.46％、6.96％和6.00％. 结论 蓬莱市是发热伴血小板减少综合征病流行地区,存在着新型布尼亚病毒隐性感染情况,牛羊狗可能是病毒主要的动物宿主.
关键词： 发热伴血小板减少综合征 SFTSV IgG抗体 -
2013年湖北省麻城市发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒人群感染状况调查
目的 调查评估麻城市人群中发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)人群感染状况,为麻城市有效控制疫情提供流行病学线索. 方法 随机抽取麻城市3个乡镇健康人群血清共159人份,采用ELISA和Real time PCR检测发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒IgG抗体、IgM抗体和特异性核酸. 结果 SFTSV-IgG抗体阳性率为5.03％,SFTSV-IgM和SFTSV-PCR全部阴性. 结论 麻城市是湖北省SFTSV的流行重点县市,需加强SFTSV的预防意识及快速诊断能力.
