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乳杆菌细胞壁成分激活人阴道上皮细胞β-防御素-2表达机制研究
目的 探讨乳杆菌细胞肇成分(Lactobacillus cell wall extract,LCWE)对人阴道上皮细胞β-防御素-2的诱导作用及细胞内信号转导机制.方法 采用实时定量PCR和Western blot方法检测LCWE处理对人阴道上皮细胞(WZV-1)β-防御素-2表达的影响;Western blot方法检测LCWE处理后WZV-1细胞内NF-κB和p38MAPK信号通路活化情况;实时定量PCR和Western blot方法检测NF-κB抑制剂和p38MAPK抑制剂预处理WZV-1细胞对LCWE诱导β-防御素-2表达的影响.结果 LCWE可诱导WZV-1细胞β-防御素-2表达且存在着明显的时间效应和剂量依赖关系,50μg/mlLCWE处理细胞8 h对β-防御素-2的上调幅度大,刺激0.5 h后可引起细胞内p38MAPK蛋白的磷酸化显著增加,1 h达到顶峰;刺激0.5 h后可引起细胞核内NF-κB含量显著增加(P<0.05),2 h达到顶峰.NF-κB抑制剂PDTC、p38MAPK抑制剂SB20380预处理WZV-1细胞,可明显抑制LCWE诱导WZV-1细胞β-防御素-2的表达.结论 LCWE具有激活NF-κB和p38MAPK信号通路诱导阴道-上皮细胞β-防御素-2的作用.
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乳杆菌细胞壁成分对小鼠阴道组织β-防御素2诱导表达的影响
目的 探讨乳杆菌细胞壁成分(Lactobacillus cell wall extract,LCWE)对小鼠阴道组织β-防御素2诱导表达的影响.方法 将雌性ICR小鼠随机分成5组,实验组给予不同浓度的(5、20和100 mg/L)LCWE 200μL阴道接种处理;阴性对照组小鼠阴道接种生理盐水,阳性对照组小鼠阴道接种大肠埃希菌EPEC104菌液(3×109CFU/mL),5 d后处死,取小鼠阴道组织,做阴道菌群分析评价,部分阴道组织提取总RNA,以β-actin为内参照,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测小鼠阴道组织β-防御素2表达.结果 20 mg/L和100 mg/L浓度LCWE处理后,小鼠阴道菌群较生理盐水组的肠杆菌、葡萄球菌明显减少(P<0.05),乳杆菌无显著性变化(P>0.05).生理盐水组小鼠阴道组织β-防御素2 mRNA表达量极低,大肠埃希菌阳性对照组能显著诱导小鼠阴道组织β-防御素2 mRNA的表达;5 mg/L浓度LCWE处理组开始,β-防御素2表达量开始提高,在100 mg/L浓度LCWE组其表达量达到高.Western blot结果显示:生理盐水组小鼠阴道组织未检测到β-防御素2蛋白表达,而100 mg/L浓度LCWE处理组和大肠埃希菌EPEC104组均出现特异性条带.结论 LCWE可上调小鼠阴道组织β-防御素2的表达且存在着剂量依赖关系.
