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B7-2分子文献资料
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人B7-2(CD86) IgV+C段高效原核表达及活性测定
目的克隆、表达B7-2(IgV+C)并进行体外功能测定.方法用聚合酶链反应(PCR)技术从B7-2 cDNA中克隆B7-2(IgV+C),在此基础上构建表达B7-2(IgV+C)的原核表达载体pGEX-4T-3/hB7-2(IgV+C);SDS-PAGE检测蛋白表达,蛋白经变性、复性后在体外协同抗CD3单抗刺激人T细胞,3H-TdR掺入法检测T细胞的活化程度.结果在原核表达载体中成功地克隆了B7-2(IgV+C),SDS-PAGE表明在相对分子质量(Mr)55×103处有hB7-2(IgV+C)/GST融合蛋白的高效表达,其表达量占菌体总蛋白的33%.体外实验证明,此融合蛋白可协同抗CD3单抗刺激人T细胞活化.结论重组蛋白B7-2(IgV+C)在第一信号存在下可活化T细胞,即具有共刺激活性.
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人类免疫共刺激信号B7-2分子逆转录病毒表达载体的构建
目的:构建含B7-2基因片段的克隆载体pGEM-B7-2和表达载体pLSN-B7-2.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从人类慢性淋巴细胞白血病Raji细胞株中扩增到人B7-2cDNA基因片段,并经回收纯化酶切后,分别连接到质粒pGEM-Teasy 和pLXSN上.结果:琼脂糖凝胶电泳及序列测定证实,扩增的B7-2cDNA片段的碱基组成与Genebank提供的人B7-2cDNA的基因组成相同.结论:酶切证实成功构建得了克隆载体pGEM-B7-2和表达载体pLSN-B7-2,为将B7-2基因转导到肿瘤细胞制备肿瘤疫苗以及研究免疫细胞间相互作用、肿瘤细胞逃避免疫监视的机制奠定了基础.
