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拼接异构体文献资料
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一种新的干扰素调节因子拼接异构体IRF-3b的结构及功能
目的干扰素调节因子(interferon regulatory factors, IRF)3是病毒感染后调节干扰素基因转录重要的转录因子,寻找IRF-3新的基因拼接异构体, 研究其结构及功能. 方法抽提人类细胞RNA,用IRF-3已发表序列设计引物,作cDNA末端快速放大(RACE)及RT-PCR,生物信息学方法比较新序列,亚克隆IRF-3b至pcDNA3.1-flag,转染人胚胎肾上皮293细胞,用抗flag抗体作Western blot分析,用荧光素酶功能分析的方法观测IRF-3b对病毒诱导的干扰素β启动子荧光素酶活性的影响. 结果发现了一种新的IRF-3拼接异构体IRF-3b,IRF-3b用了紧接第七外显子前的16个第六内含子的碱基,导致阅读框架移位,相应蛋白质的C端第328～452位为不同于IRF-3的新C末端.Western blot出现预期的相对分子质量(Mr)为57.75×103的IRF-3b蛋白强阳性条带.新的外显子序列可在小鼠的表达序列标签(EST)表达库中找到同源序列,提示这种新的异构体在生物演进中有其保守功能,IRF-3b荧光素酶功能分析显示,该同分异构体能抑制病毒诱导的干扰素β启动子活性至对照组的40%～50%. 结论新的异构体的发现为IRF-3这一重要分子的功能调节提供了新的线索,它可能是病毒感染通路中干扰素的显性负性抑制剂,提示其功能为干扰素产生的精细调节成分,可防止干扰素的过度产生,它们在人类疾病中的病理意义值得进一步探讨.
