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淋病奈瑟菌临床菌株PⅠ基因型及PⅠB基因点突变分析
目的 分析浙江地区淋病奈瑟菌株外膜孔蛋白PⅠ基因序列及其点突变与耐药性关系,了解本地区淋病奈瑟菌株PⅠA与PⅠB基因分布及其优势基因型.方法 采用高保真PCR扩增34株淋病奈瑟菌全长PⅠ基因序列,T-A克隆后测序.根据测序结果,建立多重PCR同时检测113株淋病奈瑟菌PⅠA和PⅠB基因.分析测序菌株PⅠB基因中与耐药性密切相关的G120和A121变异情况,采用二倍琼脂稀释法确定PⅠB菌株的耐药性.结果 11株PⅠA+淋病奈瑟菌均为ⅠA6血清型.23株PⅠB+淋病奈瑟菌中,6株(26.1%)为ⅠB3血清型、5株(21.7%)为ⅠB3/6血清型、2株(8.7%)为ⅠB4血清型、9株(39.1%)为ⅠB3/6-ⅠB2嵌合血清型、1株(4.3%)为ⅠB2-ⅠB4嵌合血清型.所建立的多重PCR可特异和准确地对PⅠA和PⅠB基因分型,检测灵敏度为10ngDNA模板.113株淋病奈瑟菌中,26株(23.0%)和87株(77.0%)分别携带PⅠA和PⅠB基因.经测序的23株PⅠB+淋病奈瑟菌中,1株(4.3%)G120和A121均未突变,3株(13.0%)G120或A121突变,2株8.7%)G120突变但A121缺失,17株(73.9%)双位点突变.22株G120和/或A121突变的PⅠB+菌株均对青霉素和四环素耐药.结论 所建立的多重PCR可用于淋病奈瑟菌PⅠA和PⅠB基因的分型检测.本地区流行的淋病奈瑟菌主要携带PⅠB基因.ⅠA6为PⅠA菌株优势血清型.PⅠB菌株以ⅠB3/6-ⅠB2嵌合、ⅠB3和ⅠB3/6血清型常见,但主要为耐药性G120和/或A121突变株.
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浙江地区奈瑟淋球菌临床菌株 porinⅠ基因优势型及原核表达系统的构建
目的：分析浙江地区奈瑟淋球菌临床菌株porinⅠ基因优势型分布情况，构建porinⅠA与porinⅠB基因的原核表达系统。方法在先前研究的基础上，对确定的porinⅠA和porinⅠB基因进行T－A克隆后测定核苷酸顺序，分析porinⅠA和porinⅠB的地区优势基因型。再构建porinⅠA和porinⅠB基因优势基因型的原核表达系统，0．5mmoL／LIPTG诱导后，10％SDS－PAGE检测蛋白表达情况。结果测序的5株porinⅠA全为血清型ⅠA－6；测序的11株porinⅠB中，血清型ⅠB－3有5株，血清型ⅠB－3／6有3株，血清型ⅠB－6有1株，其余2株为变异株。构建的原核表达系统PET－42－PⅠA的PⅠA表达量占细菌总蛋白量的30％；PET－42－PⅠB的PⅠB表达量占细菌总蛋白量的20％。结论浙江地区奈瑟淋球菌临床菌株porinⅠA以血清型ⅠA－6为优势基因型，porinⅠB以血清型ⅠB－3为优势基因型，porinⅠA相对于porinⅠB而言更加保守。所构建的原核表达系统能高效表达PⅠA与PⅠB重组蛋白。
