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D3细胞的制备及其对几种病原体的敏感性研究
目的制备基因转染(D3)细胞并测定能引起先天性感染的几种病原体的敏感性.方法HEP-2细胞的DNA转染人胚肺细胞(HEL),得到基因转染细胞,命名为D3细胞.分析D3细胞的核型.研究丹参对D3细胞促增殖作用和丹参对病原体不同的促增殖作用.普通显微镜观察病原体感染D3细胞后的细胞病变.免疫荧光试验研究D3细胞对病原体的敏感性.电子显微镜观察由D3细胞培养物纯化的病原体形态.在酶联免疫吸附试验(ELISA)中,分别纯化病原体制作抗原,检测1196份孕妇血清特异性抗体(IgG、IgM).结果传代5～100代的D3细胞的染色体数均是96.丹参(SMB,100μg/ml)对D3细胞和病原体有明显的促增殖作用.D3细胞感染病原体后72 h,均出现明显的细胞病变效应(CPE)和荧光阳性细胞.电镜下见到了病原体典型的形态.结论永生性的D3细胞可用于培养病原体,所培养的病原体可制备用于诊断的抗原.
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转铁蛋白SA阳离子脂质体介导DNA转染肝癌细胞 SMMC-7721的实验研究
目的检测HTf(Fe)2SA阳离子脂质体是否具有靶向转染肝癌细胞的能力.方法在有血清和无血清两种条件下检测HTf(Fe)2SA阳离子脂质体和SA阳离子脂质体介导DNA进入肝癌细胞SMMC-7721和小鼠B16黑色素瘤细胞内的量.结果在有血清和无血清两种转染条件下HTf(Fe)2SA阳离子脂质体介导入SMMC-7721细胞内DNA的量明显高于SA阳离子脂质体,而对小鼠B16黑色素瘤细胞两者无明显差异.结论HTf(Fe)2SA阳离子脂质体在体外具有良好的靶向介导DNA转染肝癌细胞的能力.
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基于柔性微电极芯片活体电穿孔提高PD-1质粒DNA转染效率
目的 开发一种柔性微电极芯片提高以PD-1质粒为模版的DNA转染效率.方法 运用微机电系统加工柔性衬底的微电极芯片,在体外对HEK293细胞进行电转染GFP质粒,验证柔性微电极芯片的可靠性.在活体动物进行电穿孔转染PD-1质粒实验,BALB/C小鼠共分3组,每组5只,分别给予0 V·cm-2, 100 V·cm-2, 200 V·cm-2不同电场强度进行电穿孔,间接ELISA法检测电转后不同时间点的血清中抗PD-1抗体滴度.结果制备的柔性微电极芯片,能够转染GFP质粒到HEK293细胞内表达蛋白;在活体实验中,采用微电极芯片电穿孔免疫5次后2周,小鼠血清中PD-1抗体达到峰值.结论 基于柔性微电极芯片的活体电穿孔能够有效提高DNA转染效率,增强免疫应答.
