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仙台病毒 Tianjin 株缺陷干扰颗粒体内外诱导大鼠脑胶质瘤细胞凋亡的研究
目的探讨仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒（ defective interfering particles ，DI颗粒）体内外诱导大鼠脑胶质瘤细胞C6凋亡的作用。方法将不同滴度仙台病毒Tianjin株DI颗粒分别与大鼠脑胶质瘤细胞C6作用不同时间，以培养基作为阴性对照、完整病毒作为阳性对照，通过DNA片段琼脂糖凝胶电泳、TUNEL染色、AnnexinⅤ-FITC/PI标记流式细胞仪分析等检测细胞凋亡情况。建立大鼠皮下胶质瘤模型，通过测量肿瘤大小观察DI颗粒抑瘤作用，病理切片HE染色观察肿瘤组织病理变化，TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况。结果 C6细胞在体外经DI颗粒诱导后， DNA片段琼脂糖凝胶电泳呈阶梯状；流式细胞仪及TUNEL检测显示，DI颗粒组与完整病毒组细胞凋亡率明显增高，且呈时间-剂量依赖型。动物实验结果显示，DI颗粒和完整病毒均可明显抑制肿瘤生长；肿瘤组织病理切片HE染色显示DI颗粒组和完整病毒组瘤结节内瘤细胞较少；TUNEL原位细胞凋亡检测显示DI颗粒组和完整病毒组凋亡细胞明显增加，以上结果与阴性对照组比较差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论仙台病毒Tianjin株DI颗粒在体内外均能引起大鼠脑胶质瘤C6细胞凋亡，且呈时间-剂量依赖型，提示DI颗粒有辅助治疗脑胶质瘤的可能性。
关键词： 仙台病毒Tianjin株 缺损干扰颗粒 大鼠脑胶质瘤细胞C6 凋亡 -
仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒对荷瘤小鼠的抑瘤作用
目的 通过小鼠结肠癌动物模型探讨仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒(DIP)的抗肿瘤作用及其机制.方法 将CT26细胞悬液0.1 ml皮下注射Bal B/c小鼠背部,建立小鼠结肠癌模型,将小鼠随机分为Tianjin株DIP组(注射CT26后第4、7、10和13天,每天瘤内注射1次Tianjin株DIP 0.1 ml)和生理盐水对照组(瘤内注射生理盐水0.1ml),每组10只.通过测量肿瘤大小和观察小鼠存活率确定DIP的抑瘤作用.采用流式细胞仪和酶联免疫吸附(ELISA)法检测DIP在体外对小鼠树突状细胞(DCs)成熟及分泌白细胞介素6(IL-6)、干扰素α(IFN-α)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的促进作用.采用real time RT-PCR和免疫组化法检测DIP对小鼠肿瘤组织中CD4+、CD8+T细胞及CD1 1c+ DCs表达的影响.结果 至注射CT26后第22天,Tianjin株DIP组小鼠的肿瘤体积为(33.2 ±2.0)mm3,与生理盐水对照组[(2 376.0±130.8)mm3]比较,差异有统计学意义(P＜0.01).至注射CT26后第50天,Tianjin株DIP组小鼠的存活率为90.0％,明显高于生理盐水对照组(30.0％,P＜0.01).流式细胞仪检测显示,小鼠DCs表面CD40、CD80和CD86标志分子的表达率随病毒剂量的升高而升高,且Tianjin株DIP组和完整病毒组之间的差异无统计学意义(均P＞0.05).ELISA法检测显示,DIP能够促进小鼠DCs分泌IL-6、IFN-α和TNF-α,且呈剂量依赖性.real time RT-PCR检测结果显示,停止给药后24、48和120 h取得的小鼠肿瘤组织中CD4、CD8和CD11c mRNA的表达水平均有所升高,且在120h表达达高峰.免疫组化检测结果显示,Tianjin株DIP组肿瘤组织中CD4+T细胞、CD8+T细胞和CD1 1c+ DCs占总细胞的百分比分别为(21.60±1.49)％、(22.12±2.84)％和(23.05±2.91)％,而生理盐水对照组分别为(2.62±0.60)％、(4.05 ±0.12)％和(3.10±0.09)％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 Tianjin株DIP可以在小鼠体内发挥抗肿瘤作用,其作用机制与激活DCs和T细胞诱导的抗肿瘤免疫有关.
