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应用 PCR 技术和 wciP 基因测序方法鉴定6群肺炎链球菌血清型
目的:利用分子生物学方法,包括PCR技术和wciP基因测序鉴别6群肺炎链球菌血清型。方法根据GenBank上发表的wchA基因和wciO基因设计合成6群特异性引物,wciNα基因设计合成6A/B型特异性引物,wciNβ基因设计合成6C/D型特异性引物,做PCR扩增,凝胶电泳确认PCR产物;根据wciP基因设计6群特异性引物,PCR扩增后产物测序确定第584位核苷酸。结果原6A型9株菌株(编号为6A-1至6A-9)和原6B型7株菌株(编号为6B-1至6B-7)用6群特异性引物进行的扩增均有分子量在2.0 kb左右的PCR产物,而1型没有PCR产物;除6A-2、6A-3、6B-3和6B-7外,其余菌株用6A/B型特异性引物进行的扩增有600 bp左右的PCR产物;6A-2、6A-3、6B-3和6B-7用6C/D型特异性引物进行的扩增有750 bp左右的PCR产物;测序结果确认原6A型9株菌株wciP基因第584位为G,原6B型7株菌株wciP基因第584位为A。结论6A-1、6A-4、6A-5、6A-6、6A-7、6A-8、6A-9属于6A型,6A-2、6A-3属于6C型,6B-1、6B-2、6B-4、6B-5、6B-6属于6B型,6B-3和6B-7属于6D型。