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通用载体文献资料
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肺癌靶向通用载体hu3D3/cSA融合蛋白的制备和活性分析
目的 制备一种新型的肺癌靶向通用载体hu3D3与核心链霉亲和素(core-streptavidin,cSA)的融合蛋白hu3D3/cSA,并鉴定其活性.方法 PCR扩增cSA基因,克隆至质粒hu3D3/pET-22b(+)而获得表达载体hu3D3/cSA/pET-22b(+),并在E. coli BL21(DE3)中表达,镍亲和层析柱纯化hu3D3/cSA融合蛋白,采用TEA缓冲液进行复性.SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白四聚体的形成.FITC标记hu3D3/cSA,通过荧光显微镜分析hu3D3组分的抗原反应性和特异性,流式细胞术比较hu3D3/cSA和hu3D3与靶点的结合能力;ELISA和Western blot鉴定cSA组分结合生物素(biotin)的能力.结果 获得序列正确的hu3D3/cSA/pET-22b(+)重组子,融合基因在E.coli BL21(DE3)中主要以包涵体的形式表达.纯化复性后的融合蛋白能够形成四聚体复合物,保留了cSA结合生物素的活性,hu3D3组分能与肺癌细胞表面抗原结合,且结合能力与单体hu3D3相比有明显增强.结论 成功制备了具有结合靶抗原和生物素活性的hu3D3/cSA融合蛋白,同时改善了hu3D3组分结合其靶点的亲合力(avidity).因此,hu3D3/cSA可以作为一个通用的肺癌靶向载体,与多种生物素化的抗肿瘤药物或试剂联用,有望为多药物联合靶向治疗肺癌提供一种可行的方法.
