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三特异单链抗体(scTsAb)文献资料
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抗人卵巢癌×抗人CD3×抗CD28VH单链三特异抗体的胞内可溶表达、纯化及体外活性测定
目的研究抗人卵巢癌(ovarian carcinoma, oc)×抗人CD3×抗CD28VH单链三特异抗体(single chain trispecific antibody, scTsAb)在大肠杆菌中的可溶表达与纯化及纯化后产物的活性测定,从而为其应用于卵巢癌治疗的临床研究打下基础. 方法将已构建的scTsAb表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3) Star菌株,采用低温(30℃)、低剂量IPTG(0.2mmol/L)诱导,进行胞内可溶表达.根据抗卵巢癌三特异抗体(oc TsAb)等电点较高(pI9.0),而菌体蛋白大多为酸性蛋白的特点,利用DEAE弱阴离子交换层析(pH8.0)进行一步纯化,并利用ELISA及FACS的方法检测纯化后抗卵巢癌三特异抗体的活性. 结果 (1) SDS-PAGE鉴定低温诱导时可溶比例达到56%.(2) 绝大多数菌体蛋白被DEAE层析柱吸附,而抗卵巢癌三特异抗体在穿透液中流出, SDS-PAGE检测纯度达到90%.(3) ELISA结果显示纯化后的抗卵巢癌三特异抗体与重组CD28纯抗原,Jurkat(CD3+)细胞膜提取抗原,SKOV3细胞膜提取抗原均有特异性结合.(4) FACS结果证明纯化后的抗卵巢癌三特异抗体与Jurkat(CD3+)活细胞、SKOV3活细胞有特异性结合. 结论低温诱导胞内可溶表达的抗人卵巢癌×抗人CD3×抗CD28VH单链三特异抗体经弱阴离子交换层析一步纯化后仍保持原有免疫学活性,这为大量制备样品,用于进一步生物活性鉴定及临床实验提供了技术基础,也为制备类似的基因工程抗体提供了参考.
