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Chromofungin抑制TNF-α诱导血管内皮通透性增加的钙信号机制
目的 探讨嗜铬粒蛋白A(chromogranin A,CGA)衍生多肽Chromofungin (CHR)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导血管内皮细胞钙内流的影响.方法 以人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞为研究对象,建立TNF-α刺激炎症模型,实验分为对照组、TNF-α组、10 nmol/LCHR+ TNF-α组、100 nmol/L CHR+TNF-α组和1 000 nmoL/L CHR+ TNF-α组.Transwell小室法检测EA.hy926细胞通透性,激光共聚焦法检测EA.hy926细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化.结果 与对照组比较,TNF-α组明显增加EA.hy926细胞通透性[(1.189±0.086)vs.(1.771±0.195),t=4.343,P=0.01];10 nmol/L、100 nmol/L和1 000 nmol/L CHR抑制TNF-α诱导的EA.hy926细胞通透性增加,其中10 nmol/L和100 nmol/L CHR显著降低TNF-α诱导的EA.hy926细胞高通透性[(1.771±0.195)vs.(1.315±0.134),t=3.403,P=0.042;(1.771 ±0.195)vs.(1.236±0.181),t=3.985,P=0.017],1 000 nmol/L CHR降低TNF-α诱导的EA.hy926细胞高通透性,差异无统计学意义[(1.771 ±0.195)vs.(1.411 ±0.255),t=2.679,P=0.126].10nmol/L、100 nmol/L和1 000 nmol/L CHR作用于EA.hy926细胞时细胞内Ca2+浓度无明显变化.TNF-α诱导EA.hy926细胞外Ca2+快速内流,各时间点细胞内Ca2+荧光强度F40、Ftl100与起始荧光值F130比较,差异具有统计学意义[荧光强度分别为:(41.497 ±3.788)vs.(56.193 ±3.082),F=196.129,P=0.000;(41.497±3.788)vs.(53.457±4.536),F=101.19,P=0.000],10nmol/L、100 nmol/L和1 000 nmol/L CHR能够抑制TNF-α引起的Ca2+快速内流.结论 CHR抑制TNF-α诱导的EA.hy926细胞通透性增加,这一作用可能是通过阻止TNF-α诱导的细胞外Ca2+内流来实现的.
