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肠道5-HT与血管活性肠肽在断奶仔小鼠应激腹泻中的相关性分析
目的：：为了探讨断奶仔小鼠应激腹泻发生中5-HT和VIP之间的互作机制。方法：将21 d断奶ICR小鼠分为正常对照组,应激腹泻组(番泻叶0.4 kg/L按体重15mL/kg灌胃同时后肢束缚应激),CH药物对照组(氢溴酸西酞普兰,是一种高选择性5-HT再摄取抑制剂,抑制5-HT再摄取灭活过程,使5-HT含量增加。10 mg/kg体重溶解于0.1 mL生理盐水,腹腔注射),CH+应激腹泻组(CH药物处理4h后进行应激腹泻处理),PCPA对照组(对氯苯丙氨酸,是一种5-HT合成抑制剂,抑制5-HT合成,300 mg/kg溶解于0.1 mL生理盐水,腹腔注射),PCPA+应激腹泻组。常规饲养。处理5d后小鼠脱颈椎死,取十二指肠、空肠、回肠、结肠组织保存于-80℃用作放射免疫检测。放射免疫测定十二指肠,空肠,回肠和结肠中VIP的表达量。结果：十二指肠中,与对照组相比,应激腹泻组小鼠VIP 的表达量升高了38.78%,差异显著( P=0.000)；PCPA组小鼠VIP的表达量降低了16.91%,差异显著( P=0.034)；CH组小鼠VIP的表达量升高了65.60%,差异显著(P=0.000)。与应激腹泻组相比,PCPA+应激腹泻组小鼠VIP的表达量升高了8.61%,差异不显著(P=0.122)；CH+应激腹泻组 VIP 的表达量升高到(5.99±0.08)pg/mgpro,差异显著(P=0.000)。空肠中,与对照组(0.51±0.02)pg/mgpro相比,应激腹泻组小鼠VIP的表达量升高了15.68%,差异不显著(P=0.308)；PCPA组VIP的表达量降低到了(0.39±0.02)pg/mgpro,差异不显著(P=0.155)；CH组小鼠VIP的表达量升高了25.49%,差异不显著( P=0.109)。与应激腹泻组( 0.59 ± 0.11) pg/mgpro相比, PCPA+应激腹泻组小鼠VIP的表达量降低,但差异不显著( P=0.428)；CH+应激腹泻组VIP的表达量升高了40.68%,差异显著(P=0.009)。回肠中,与对照组(0.50±0.06)pg/mgpro相比,应激腹泻组小鼠VIP的表达量升高,差异不显著( P=0.582)；PCPA组小鼠VIP的表达量降低了22.00%,差异显著( P=0.030)；CH组VIP的表达量升高了32.00%,差异显著(P=0.003)。与应激腹泻组相比,PCPA+应激腹泻组表达量升高了25%,差异显著( P=0.012)；CH+应激腹泻组VIP的表达量升高了42.31%,差异显著( P=0.001)。结肠中,与对照组相比,应激腹泻组小鼠VIP的表达量升高了5.88%,差异不显著( P=0.607)；PCPA组表达量降低了26.47%,差异显著(P=0.044)；CH组的表达量无变化。与应激腹泻组相比,PCPA+应激腹泻组小鼠VIP 的表达量升高了37.50%,差异显著( P=0.005)；CH+应激腹泻组小鼠VIP的表达量升高了6.94%,差异不显著( P=0.572)。结论：总之,断奶仔小鼠应激腹泻导致肠道VIP的表达量升高；PCPA诱导5-HT降低后, VIP的表达量出现显著降低,而CH诱导5-HT升高后VIP的表达量亦出现显著升高。因此,5-HT和VIP在断奶仔小鼠应激腹泻发生中呈现高度相关性。
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5-HT对断奶仔小鼠应激腹泻肠隐窝干细胞标记基因的影响
目的：：为了探讨5-HT损伤断奶仔小鼠应激腹泻肠黏膜屏障的机制,检测了5-HT对断奶仔小鼠肠隐窝干细胞标记基因(Olfm4,Lgr5)的影响。方法：将40只雄性21 d断奶ICR小鼠随机分为4组,分别为正常对照组,应激腹泻组(番泻叶0.4 kg/L按体重15mL/kg灌胃同时后肢束缚应激),CH药物对照组(氢溴酸西酞普兰,是一种高选择性5-HT再摄取抑制剂,抑制5-HT再摄取灭活过程,使5-HT含量增加。10 mg/kg体重溶解于0.1 mL生理盐水,腹腔注射),CH+应激腹泻组(CH药物处理4h后进行应激腹泻处理),常规饲养。处理5 d后小鼠脱颈椎死,取十二指肠、空肠、回肠、结肠组织保存于-80℃用作PCR检测。结果：Olfm4是肠上皮隐窝干细胞的标记基因,其表达量高低可能间接反应肠上皮干细胞的增殖状况。应激腹泻组小鼠小肠干细胞表达量均显著升高,十二指肠13.07%(P=0.000),空肠32.96%(P=0.000),回肠15.54%(P=0.000),结肠47.75%(P=0.000)。 CH 对照组与正常对照组相比十二指肠14.38%(P=0.000),空肠23.94%(P=0.000),回肠12.29%(P=0.011),结肠48.88%(P=0.000)均显著升高。 CH+应激腹泻组与应激腹泻组相比,十二指肠29.07%(P=0.000),空肠6.36%(P=0.000),回肠16.80%(P=0.000),结肠47.03%( P=0.000)均显著升高。 CH+应激腹泻组与CH对照组相比十二指肠60.63%,空肠25.55%( P=0.000),回肠23.16%( P=0.000)和结肠48.03%( P=0.000)。 Lgr5干细胞标记基因表达量显著低于Olfm4,但是各处理组之间差异显著增加。与正常对照组相比应激腹泻组十二指肠,空肠,回肠Lgr5干细胞标记基因表达量均显著升高,分别为十二指肠71.95%( P=0.015),空肠47.11%( P=0.010),回肠1.52倍(P=0.012),CH对照组与正常对照组相比,十二指肠升高3.48倍(P=0.000),空肠1.15倍(P=0.001),回肠1.65倍(P=0.001)。 CH+应激腹泻组与应激腹泻组相比,十二指肠、空肠、回肠分别显著升高了2.88倍(P=0.003),1.88倍(P=0.014),3.59倍(P=0.000)。而CH+应激腹泻组与CH对照组相比也呈现显著增加的趋势,Lgr5干细胞标记基因表达量表现为十二指肠升高48.59%(P=0.029),空肠96.54%( P=0.024),回肠3.36倍( P=0.000)。但是在结肠四组之间Lgr5干细胞标记基因表达量呈现逐渐下降的趋势,为应激腹泻组、CH对照组,CH+应激性腹泻组均显著低于正常对照组51.70%(P=0.000),75.56%( P=0.000),84.36%( P=0.000)。 CH+应激腹泻组Lgr5干细胞标记基因表达量低,比应激腹泻组和CH对照组显著降低67.63%( P=0.000)和36.02%( P=0.142)。结论：断奶应激腹泻与CH诱导的肠道5-HT含量升高均使小鼠小肠肠隐窝干细胞标记基因表达量代偿性升高,破坏维持肠隐窝上皮细胞自我更新的稳态。
关键词： 5-HT 断奶仔小鼠 应激腹泻 肠隐窝干细胞标记基因
