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芦荟大黄素对PC12细胞骨架保护作用的实验研究
目的 研究芦荟大黄素(AE)对H2O2及甲醛引起的PC12细胞损伤的保护作用.方法 将PC12细胞分成AE+H2O2干预组、H2O2损伤组、AE+甲醛干预组、甲醛损伤组、AE对照组和正常对照组6组.各组加入相应药物干预2 h后用不同浓度H2O2或甲醛损伤后进行细胞骨架及凋亡染色、LDH检测.结果 AE+H2O2干预组LDH(67.7±5.5)U/L显著低于H2O2损伤组的(92.0±9.9)U/L(P<0.01);AE+甲醛干预组LDH与甲醛损伤组比较差异无统计学意义(P>0.05);AE+H2O2干预组细胞骨架损伤、凋亡较H2O2损伤组少.结论 AE可通过纠正H2O2诱导的细胞骨架的异常改变,阻滞或延缓PC12细胞的过度凋亡但对甲醛诱导的细胞骨架重排无明显保护作用.
关键词： 芦荟大黄素/药理学 PC12细胞/药物作用 -
脑益康药物血清对谷氨酸和过氧化氢诱导的PC12细胞损伤的保护作用
目的:运用血清药理学方法观察脑益康药物血清对谷氨酸和过氧化氢诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法:①实验于2004-10/12在南通大学基础医学院病理生理实验室完成.采用12月龄SD大鼠24只,随机分为2组:对照组和脑益康灌胃组,每组12只,脑益康组以人等效剂量的1.5倍连续10 d灌胃,末次灌胃后1 h采血,收集脑益康药物血清.收集对照组(灌胃等量生理盐水)血清为对照.②PC12细胞经神经生长因子诱导7 d后,用DMEM基础培养基洗2次,DMEM培养基中分别加入100,300,500g/L脑益康中药血清,于37℃培养1 h,后加入0.2 mmol/L谷氨酸,0.5 mmol/L过氧化氢继续培养30 min.同时设模型组(造成谷氨酸和过氧化氢诱导PC12细胞损伤模型)及对照组(对照组大鼠血清,不加谷氨酸和过氧化氢).③采用四唑盐比色法测定PC12细胞存活率;按由南京建成生物工程公司提供测试盒说明书进行乳酸脱氢酶释放量、丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性测定.④计量资料差异比较采用ANOVA法.结果:①谷氨酸和过氧化氢模型组的PC12细胞存活率明显低于对照组(P<0.05,0.01);而乳酸脱氢酶释放量明显高于对照组(P<0.01);谷氨酸和过氧化氢模型组的PC12细胞丙二醛含量明显高于对照组(P<0.01);而超氧化物歧化酶活性明显低于对照组(P<0.01).②脑益康药物血清组PC12细胞存活率明显高于谷氨酸模型组和过氧化氢模型组(P<0.05～0.01);而细胞的乳酸脱氢酶释放量明显低于谷氨酸模型组和过氧化氢模型组(P<0.05～0.01).③脑益康药物血清组丙二醛含量明显低于谷氨酸模型组和过氧化氢模型组(P<0.05,0.01);而超氧化物歧化酶活性明显高于谷氨酸模型组和过氧化氢模型组(P<0.05).结论:脑益康药物血清能明显减轻谷氨酸和过氧化氢诱导的PC12细胞的损伤,其机制可能与减少膜脂质过氧化物生成,提高抗氧化酶活性有关.
关键词： PC12细胞/药物作用 谷氨酸 过氧化氢 -
葛根总黄酮对过氧化氢所致PC12细胞氧化损伤的防护
背景:葛根具有防治高血压、心脏病、糖尿病和血液病等多种生物学功效,其提取物对S180肉瘤及Lewis肺癌的增殖有一定抑制作用.目的:观察葛根总黄酮对嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞生长的影响和抗过氧化氢所致细胞氧化损伤的防护作用.设计:完全随机分组设计,对照实验.单位:解放军总医院生化科和老年病研究所.材料:葛根购自同仁堂药店,由本实验室用乙醇、乙酸乙酯按常规提取分离提纯葛根总黄酮,用理化方法和薄层色谱进行鉴定,定量测定提取物中葛根素含量为31.79%.四甲基偶氮唑盐(Sigma公司).鲁米诺购自Sigma公司.抗氧化活性试剂用黄嘌呤氧化酶(Sigma公司).PC12细胞为解放军总医院老年病研究所惠赠.方法:实验于2001-01/07在解放军总医院老年病研究所完成.①以20 g/L DMEM细胞培养液(pH 7.1～7.2)培养细胞.将培养细胞按随机抽签法分为2组:葛根总黄酮组和过氧化氢损伤+葛根总黄酮组,其中每组又根据葛根总黄酮的浓度平行分为5个质量浓度进行观察(0,1.0 mg/L,10,100mg/L,1.0 g/L),每组平行培养8 孔,每孔100mL培养液(细胞数为1×109L-1),葛根总黄酮组于37℃条件下,加入葛根总黄酮培养72 h;过氧化氢+葛根总黄酮组:在37℃条件下,加入葛根总黄酮培养48 h后,再加入500 mmol/L过氧化氢,继续培养24 h.②用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞活性;用Griess方法测定培养液中亚硝酸盐含量,用次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶测定培养液中的超氧化物歧化酶活性,以观察葛根总黄酮对PC12细胞生长活性的调控;并外源性加入过氧化氢,观察葛根总黄酮对过氧化氢所致培养PC12细胞氧化损伤的防护作用;结果以抑制率表示[(空白A值-测定A值)/空白A值×100%],抑制率越高,说明培养液中清除O2-的能力越强.③数据间差异比较采用单因素方差分析.主要观察指标:葛根总黄酮对PC12细胞培养液中亚硝酸盐含量、超氧化物歧化酶活性、及细胞活性的影响.结果:①葛根总黄酮对PC12细胞活力的影响:1～10mg/L的葛根总黄酮对PC12细胞的生长无明显影响,100mg/L葛根总黄酮可促进PC12细胞的生长(P＜0.05),当葛根总黄酮在培养液中的浓度增加至1.0g/L时,则表现出明显地抑制细胞生长效能(P＜0.01).培养液中葛根总黄酮浓度在1～100 mg/L内可有效提高过氧化氢损伤组细胞的活力(P＜0.05).②葛根总黄酮对PC12细胞培养液清除O2-的影响:葛根总黄酮组和过氧化氢损伤+葛根总黄酮组清除O2-的能力均随着葛根总黄酮质量浓度的增加而逐渐升高(除外过氧化氢+葛根总黄酮组加入葛根总黄酮lmg/L时),具有明显量效关系.两组均在加入100 mg/L和1 g/L葛根总黄酮时PC12细胞培养液中超氧化物歧化酶活性明显高于未加入葛根总黄酮时(P＜0.05～0.01).③葛根总黄酮对PC12细胞亚硝酸盐的调控:低浓度(1～100 mg/L)的葛根总黄酮使培养细胞亚硝酸盐生成减少,但培养液中葛根总黄酮浓度达1 g/L时,亚硝酸盐生成量则增加.结论:①葛根总黄酮对培养的PC12细胞具有一定生长调控作用,低质量浓度(1～100 mg/L)时促进细胞生长,高质量浓度(1g/L)时抑制细胞生长,但抗氧化能力强.②在培养液中加入1～100 mg/L的葛根总黄酮对过氧化氢所致PC12氧化损伤具有明显防护效能.
关键词： 葛根 黄酮类 PC12细胞/药物作用 超氧化物歧化酶 -
五味子乙素和五味子醇甲对PC12细胞氧化损伤的保护作用
目的:观察五味子乙素和五味子醇甲对过氧化氢(H2O2)PC12细胞氧化损伤的保护作用.方法:实验于2005-08/2006-07在首都医科大学附属北京中医医院中心实验室完成.①PC12细胞培养在RPMI 1640培养液中,加入2.5,5,10,20μmol/L等不同浓度的五味子乙素和五味子醇甲,与细胞培养24 h,然后加入0.1,0.2,0.3,0.5 mmol/L不同浓度过氧化氢(H2O2)溶液,37℃作用30 min.模型组细胞只加入H2O2;正常对照组只加入等量的培养基.②采用倒置显微镜观察PC12细胞形态学变化,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞生存率,用自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶的活性,按试剂盒说明书用慧星法测定细胞内DNA损伤.结果:①五味子乙素及五味子醇甲对PC12细胞形态学的影响:倒置相差显微镜观察到PC12细胞被H2O2损伤后,细胞形态学发生变化,表现为胞体肿胀、突起断裂、细胞膜溶解等.经五味子乙素及五味子醇甲处理后细胞,状态明显改善,细胞数目较多,而且细胞形态较完整.②五味子乙素及五味子醇甲对细胞生存率的影响:PC12细胞经0.1,0.2,0.3,0.5 mmol/L不同浓度H2O2处理30 min后,与正常对照组相比,四甲基偶氮唑盐法测定其生存率,分别降低了4%,13%,40%,57%,(P＜0.05或P＜0.01).不同浓度的五味子乙素及五味子醇甲(2.5～20μmol/L)均能提高细胞的生存率,并呈浓度依赖关系,浓度为5,10,20 μmol/L时,与模型组比较,具有明显的差异(P＜0.05或P＜0.01),特别是10 μmol/L五味子乙素及五味子醇甲的作用较强.③五味子乙素及五味子醇甲对细胞内乳酸脱氢酶和DNA损伤的影响:用0.3 mmol/L H2O2处理细胞后细胞内乳酸脱氢酶漏出率高于正常对照组(P＜0.01).大量的DNA被损伤,与正常对照组比较,差异有显著性(P＜0.01).细胞与10.0μmol/L五味子乙素及五味子醇甲作用后发现细胞内乳酸脱氢酶漏出率低于模型组(P均＜0.01).DNA损伤明显抑制,与模型组比较,差异有显著性(P均＜0.01).结论:五味子乙素及五味子醇甲均能有效地减轻H2O2对神经细胞的氧化损伤作用.推测保护作用机制是通过清除氧自由基,减轻其对DNA的损伤等方面实现的.
关键词： 五味子素 五味子 PC12细胞/药物作用 过氧化氢 -
齐留通减轻小鼠小胶质细胞介导的鱼藤酮对PC12细胞的毒性作用
目的:观察5-脂氧酶选择性抑制剂齐留通对小胶质细胞介导的鱼藤酮神经毒性的影响.方法:以鱼藤酮预处理的小鼠小胶质BV2细胞条件培养液培养PC12细胞,通过MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)释放分析PC12细胞损伤和活性变化,Hoechst/碘化丙啶荧光双染检测PC12细胞死亡,并评估齐留通对小胶质细胞介导细胞毒性的作用.结果:1、3、10 nmol/L鱼藤酮对PC12细胞无直接毒性,但是其预处理的BV2细胞条件培养液间接诱导PC12细胞形态改变、活性下降,LDH释放和细胞死亡明显增加;0.01、1μmol/L齐留通能有效减轻小胶质细胞介导的鱼藤酮细胞毒性作用.结论:5-脂氧酶抑制剂齐留通能减轻小胶质细胞介导的鱼藤酮神经毒性,提示5-脂氧酶通路在小胶质细胞炎症诱导的神经细胞死亡中有重要作用.
