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荧光差异二维电泳文献资料
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基于荧光差异二维电泳技术的临床尿液蛋白质组学研究方法探讨
目的 探讨尿液蛋白质组学研究中样本留取、尿样储存、蛋白浓缩、荧光标记以及二维电泳过程中的关键问题和具体方法,以期为临床开展相关研究奠定方法学基础. 方法选取尿蛋白<0.15g/24h的糖尿病和高血压男性患者,床边留取新鲜尿液.尿液混合后根据是否添加蛋白酶抑制剂、长期保存温度、蛋白除盐方法和一向同相PH梯度等电聚焦胶条的不同,分为7组,所有样本都进行了双向电泳分析比较,部分标本进行了荧光差异电泳分析.结果 从双向电泳结果可以明显看出加入蛋白酶抑制剂、-80℃冰箱保存、反复超滤离心所得到的尿液蛋白点数多:胶条以11cm,PH4-7和PH3-10 24cm的非线性胶条比较合适尿液二维电泳分析.通过不同Cydye荧光染料标记后,尿液荧光差异二维电泳(2D-DIGE)分析可以得到重复性好、便于临床和实验室开展的结果.结论 基于2D-DIGE的临床尿液蛋白质组学研究方法具有可行性,采取合适的方法可以得到良好的研究结果.
