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利用噬菌体肽库筛选汉滩病毒受体结合表位的研究
目的确定汉滩病毒(HTNV)上可与宿主细胞受体结合的一段配基表位.方法型特异性mAb 3G1,与HTNV 糖蛋白G2及核蛋白(NP)具有双结合活性,且中和效价很高.以纯化的mAb3G1作为配基,淘筛噬菌体随机12肽库,经ELISA法鉴定后,对阳性克隆进行测序并与天然病毒蛋白G2及NP的序列进行同源性比较分析.结果经3轮筛选,噬菌体显示有良好的富集效果.从第3轮筛选产物中,随机挑取21个克隆进行ELISA结合实验.结果显示,9个克隆与mAb 3G1有较强的特异结合活性;DNA测序结果表明,具有保守性序列模式PX(1-2)HX(0-2)H.该基序分别与G296YPWHTAKCHY105及NP 81PTGVEPGDHLKERS94相似. 结论从噬菌体随机肽库中,筛选到能与mAb3G1特异性结合的一段短肽基序PX(1-2)HX(0-2)H,其与HTNVG2部分氨基酸的同源性较高,可能是与宿主细胞受体结合的表位,为进一步证实和研究HTNV的受体奠定了基础.
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人参皂苷有效成分提制分析以及中药小分子单克隆抗体(Mab)的免疫学分析方法(IA)的构建
目的 探讨人参皂苷有效成分的提制方法,并分析中药小分子Mab的IA构建方法.方法 采用改良高碘酸钠氧化法合成Rg1-BSA和Rg1-PLL,并采用紫外光谱和薄层色谱法对人工抗原偶联的结果进行判断,免疫小鼠的血清抗体效价和特异性则采用间接ELISA法予以检测.结果 人参皂苷Rg1成功与BSA/PLL完成偶联,其中Rg1-BSA可以在免疫小鼠内生成抗Rg1抗体.小鼠血清抗体的效价比>1/80000,且所得抗体能与人参皂苷Rg1产生特异性结合.结论 选择合适的方法合人参皂苷Rg1的人工免疫原和报备抗原,可以为人参皂苷中有效成分Rg1以及其他中药小分子的Mab制备构建有效的IA方法.
