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绿激光前列腺汽化术治疗晚期前列腺癌合并尿潴留
解放军白求恩国际和平医院2006 年3 月至2009 年2 月采用经尿道绿激光前列腺汽化术(PVP)联合雄激素全阻断(MAB)治疗晚期前列腺癌合并尿潴留患者24 例,取得了良好疗效,现报道如下.
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CD133/prominin-1与胃肠道肿瘤的研究进展
目的:探讨CD133/prominin-1在胃肠道肿瘤患者中的表达情况及其在肿瘤诊断治疗中的意义.方法:应用PubMed及CHKI期刊全文数据库检索系统,以"胃癌、结肠癌、直肠癌、胃肠道肿瘤和CD133"等为关键词,检索1989-01-2009-10的相关文献,共检索到英文文献1071条,中文文献79条.纳入标准:1) CD133/prominin-1的基本资料介绍.2) CD133/prominin-1在正常胃肠道中的表达研究.3) CD133/prominin-1在胃肠道肿瘤患者体内表达、与临床病理和预后关系的研究.4) CD133/prominin-1与胃肠道肿瘤干细胞的关系及在肿瘤诊治中的应用研究.根据纳入的标准,精选了55篇文献,后纳入了33篇文献进行分析综述.结果:CD133/prominin-1是一个含有5个跨膜区域的单链糖蛋白,主要在干细胞、祖细胞和肿瘤干细胞表达,一直被作为分离和鉴定这些细胞的标志.胃肠道中的正常组织和肿瘤组织中均有CD133的表达,胃肠道肿瘤中的CD133表达与肿瘤干细胞、临床病理和预后有关.结论:了解CD133在胃肠道肿瘤中的表达,可以加深我们对胃肠道肿瘤发生发展机制的认识,并为将来胃肠道肿瘤的靶向治疗提供新的方向.
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Immuno-PET显像的研究进展
放射免疫显像(Immuno-PET)因其较高的特异性和较小的组织内代谢清除率,在体内高分辨率的显像能力以及在底物量化方面等具有明显优势.因此对Immuno-PET的研究也成为了近期的热点.本文对Immuno-PET的放射性同位素、标记抗体及其发展方向作一简要综述.
关键词： Immuno-PET 预定位 放射性同位素 MAB -
治疗性单抗的免疫原性研究进展
治疗性单克隆抗体(Tberapeutic mAb)已经成为药物工业发展快的领域之一,2003年到2004年之间其种类增长了48.1%.到目前为止,有26个治疗性单抗被美国食品药品管理局(FDA)批准应用于临床,超过150个抗体正在进行临床实验,其中包括8个鼠源性单克隆抗体、6个嵌合型单克隆抗体、11个人源化单克隆抗体和1个全人型单克隆抗体.这些抗体在临床上均取得了很好的效果,但是都不同程度地遇到了过敏反应和抗.
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夹心ELISA检测可溶型LAIR-1方法的建立及其应用的研究
为了探讨血清可溶型白细胞相关免疫球蛋白样受体1(sLAIR-1)的水平与疾病的关系,用生物传感器鉴定了3种抗LAIR-1分子胞膜外区mAb识别的表位,并应用2种识别不同LAIR-1表位的mAb首次建立了检测sLAIR-1的夹心ELISA方法,其检测灵敏度达到1.5μg/L.以此方法检测了活化的人PBMC培养上清以及正常人和肾综合征出血热(HFRS)患者血清中sLAIR-1的水平.在经PMA、PHA、LPS和抗CD3 mAb活化的人PBMC细胞培养上清中检测到sLAIR-1.24例正常人血清sLAIR-1的平均水平为(6.2±3.3)μg/L,62例HFRS患者血清sLAIR-1的平均水平为(47.2±35.9)μg/L.证明体内和体外存在天然sLAIR-1.HFRS患者血清sLAIR-1水平明显升高.为进一步研究LAIR-1分子的免疫调节功能及其在临床免疫中的应用提供了新的手段.
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单克隆抗体引领抗感染新方向
默克近签署了一在研人用单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)复合制剂的独家全球许可协议,获得了该药的全球研发及销售权,这一单克隆抗体是Medarex生物技术公司和马萨诸塞医学院的生物学实验室(MBL)共同开发的,用于艰难梭菌感染的治疗.
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检测瞬时受体电位通道6的ELISA双抗体夹心法的建立
目的 建立ELISA双抗夹心法以用于TRPC6蛋白的测定.方法 采用mAb相加法和配对实验,选择佳配对组合;并通过cELISA法测定mAb阻断率,以选亲和力较高的mAb进行HRP标记,终建立ELISA双抗体夹心法以用于大鼠和小鼠脑组织TRPC6蛋白的测定.结果 mAb-A2与mAb-F11的AI＞50％,配对较佳;mAb-F 11亲和力较强,IC50为0.6 μg/ml;HRP标记mAb-F11的低工作浓度为1∶1 600;建立ELISA双抗夹心法可检测到大鼠和小鼠脑组织TRPC6蛋白分别为(1.42±0.06) μg/ml和(0.88±0.04)μg/ml.检测线性范围0.625～10μg/ml,R2=0.992,组间变异系数小于10％.结论 所建立的ELISA双抗夹心法灵敏高,特异性强,重复性好,可用于脑组织中TRPC6蛋白的测定.
关键词： TRPC6 MAB ELISA双抗体夹心法 -
Inhibition of Breast Cancer Metastasis and Angiogenesis by Antiosteopontin mAb 1A12
Osteopontin (OPN) is associated with many diseases,and its role intumor growth and metastasis has been studied in breast cancers.
关键词： MAB osteopontin OPN -
抗人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体重链可变区基因的克隆和序列分析
目的:克隆并分析人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体重链可变区基因.方法:从分泌抗人VEGF单抗的杂交瘤细胞株(Ell)中提取总RNA,利用逆转录-PCR方法,克隆抗人VEGF单克隆抗体(MAB)重链可变区基因(VH),将其重组入pEGMR-T Vector测序载体测序.结果:VH基因序列全长369个碱基对,编码123个氨基酸,通过国际联机检索及Kabat库扫描证实,该VH基因符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,同源性高达87%.结论:VH基因全长369 bp,根据Kabat分类,归属小鼠重链可变区基因第Ⅱ(A)亚组,由VH-D-JH4重排产生.
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抗重组 GST单克隆抗体的制备及其在融合蛋白纯化中的应用
目的制备抗重组 GST的单克隆抗体 (mAb), 并用来纯化重组 GST融合蛋白。方法用含重组 GST融合蛋白基因的 pGEX4T -1质粒转化 E.coli BL21， IPTG诱导 GST融合蛋白表达，亲和层析和凝胶过滤法分离表达的重组 GST融合蛋白。以此蛋白作为抗原，免疫 Balb/c小鼠，按传统的杂交瘤技术制备 mAb。将抗 GST mAb经 Protein A纯化后，与 Sepharose 4B偶联。结果经 3次亚克隆后，获得两株分泌抗 GST载体特异性 mAb的杂交瘤。采用该 mAb对两种不同的 GST融合蛋白进行亲和层析纯化后，经 SDS-PAGE鉴定达到了商品化 Glutathione-Resin的亲和层析纯化效果。结论用抗 GST蛋白特异性 mAb亲和层析纯化融合蛋白是一种经济、实用的方法，且可用于 Glutathione-Resin亲和层析纯化后的二次纯化。
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辛酸-硫酸铵法纯化细胞培养上清中单克隆抗体的条件优化
常用的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)纯化方法有辛酸-硫酸铵沉淀法、离子交换色谱法、免疫亲和色谱法、蛋白A亲和层析法等,以此纯化小鼠IgG类或IgM类mAb[1-2].其中辛酸-硫酸铵沉淀法简单易行,无需复杂的仪器及设备,实验中所用试剂均为普通试剂,容易获得,比其他纯化方法更值得推广.本文探讨辛酸-硫酸铵法纯化细胞培养上清中IgG类型的mAb优化条件,目的在于更好的回收细胞培养上清中的mAb,减少mAb制备过程中的大量抗体丢失,为mAb的进一步开发利用提供实验条件.
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结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠单克隆抗体的制备及初步鉴定
目的:制备抗结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb.方法:采用杂交瘤技术,获得了11株针对结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb杂交瘤细胞株,对其中的5株进行了小鼠腹水的制备及相关鉴定.结果:5株mAb的腹水效价达到1∶32 000～1∶512 000,将这5株mAb进行了纯化,纯化后纯度大于90%,抗体亚类(型)均为IgG1/k型,ELISA结果显示制备的mAb与结核分枝杆菌Rv3881c抗原可发生特异反应.结论:制备了抗结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb,为结核分枝杆菌Rv3881c生物学功能的研究奠定基础.
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抗前列腺干细胞抗原鼠单克隆抗体的制备及其初步鉴定
目的:制备抗前列腺干细胞抗原鼠单克隆抗体(mAb).方法:采用杂交瘤技术,获得了10余株针对前列腺干细胞抗原(PSCA)的鼠mAb杂交瘤细胞株,对其中的6株进行了相关鉴定.结果:6株mAb的腹水效价均达到 1: 512 000,将其中的两株mAb进行了纯化,纯化后纯度大于90%,抗体亚类(型)mAb1、 mAb26为 IgG2b/k型,mAb6、 mAb11、 mAb37 为IgG1/k型,mAb46为 IgG2a/k型;ELISA结果显示制备的mAb与PSCA可发生特异反应.结论:制备了抗前列腺干细胞抗原鼠mAb,为PSCA生物学功能的研究打下基础.
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抗人S100A4单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用
目的:制备抗人S100A4单克隆抗体(mAb),建立检测肿瘤样品中S100A4蛋白的可靠方法.方法:采用标准杂交瘤技术得到抗重组人S100A4的mAb.以ELISA、Western blot和免疫组织化学法对抗体进行鉴定.并将抗体应用于临床人乳癌和结肠癌样品的免疫组织化学检测.结果:获得了1株稳定分泌抗人S100A4蛋白mAb的杂交瘤细胞株D101.在免疫印迹实验中,该mAb较多抗特异性更好.该mAb适用于来源于人组织的样品S100A4表达的检测,在少量乳癌和结肠癌样品的检测中给出的结果与商品化多抗的结果一致.结论:该mAb是S100A4特异的,在临床应用中有更好的重复性.
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抗藤黄微球菌Rpf结构域单克隆抗体的制备与特性鉴定
目的:克隆、表达藤黄微球菌Rpf结构域多肽,并制备针对该多肽的单克隆抗体(mAb).方法:采用聚合酶链反应(PCR)藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf结构域基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rpf结构域基因多肽,在变性条件下纯化目的蛋白.用纯化的目的蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合、克隆化制备抗Rpf domain单抗(mAb),用ELISA法初步鉴定其特异性和相对亲和力.结果:在变性条件下用Ni2+-NTA亲和色谱柱纯化目的融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%.用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了3株抗Rpf domain mAb,这3株mAb均特异性识别Rpf domain多肽.结论:所获得的抗Rpf domain mAb特异性强、效价高,对进一步研究Rpf domain在结核病免疫预防中的作用提供了有力的工具.
关键词： 结核分枝杆菌 藤黄微球菌 Rpf domain MAB -
双抗体夹心ELISA检测SEB方法的建立及在不同基质中检测的应用
目的:建立检测SEB的双单克隆抗体(mAb)夹心ELISA, 并检测在多种基质中SEB的敏感性.方法:制备、纯化抗SEB mAb B4和D6.D6 mAb标记辣根过氧化物酶(HRP)作为检测抗体, B4 mAb作为包被抗体.结果:成功建立了敏感、特异检测SEB的ELISA方法, 检测抗体稀释液和小牛血清中SEB, 检测灵感度0.2 μg/L, 定量线性范围0.78 ～12.5 μg/L, r2=0.992, 批间变异系数(CV)＜10%, 回收率80% ～110%.检测50 g/L脱脂牛奶、尿液和自来水中的SEB, 灵敏度0.39 μg/L, 定量线性范围0.78 ～25 μg/L, r2=0.997.与SEA和SECl无交叉反应.结论:本方法测量准确, 灵敏度高, 特异性好, 在食品工业和临床标本检测中有广阔的应用前景.
关键词： ELISA 金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB) MAB 检测 -
人CD112(Nectin2/PRR2)单克隆抗体的制备和鉴定
目的:表达和纯化CD112 胞膜外区重组蛋白, 制备针对CD112胞膜外区的单克隆抗体(mAb), 并且研究CD112的分布.方法:采用基因重组技术在真核系统表达CD112-Fc融合蛋白, 亲和层析法进行蛋白纯化;纯化的CD112-Fc融合蛋白免疫BALB/c小鼠, 杂交瘤技术建立分泌CD112 mAb的杂交瘤细胞株, 间接ELISA、 Western blot及FCM鉴定mAb 的特异性.用流式细胞术(FCM)检测 CD112 的细胞系分布.结果:构建了高效真核表达载体pIg3C-CD112, 表达并纯化了CD112-Fc融合蛋白, 其纯度大于 90%.以纯化重组蛋白为免疫原共制备9株分泌抗CD112 mAb的杂交瘤细胞株(命名为FMU-CD112.1 ～FMU-CD112.9), 制备腹水并纯化 mAb.FMU-CD112.1、 3、 6和8能用于Western blot, FMU-CD112.1、 4、 6和8可用于 FCM.CD112细胞分布检测显示该分子主要分布在正常上皮及内皮细胞系、巨核细胞谱系和部分T细胞系, 并高表达于上皮及内皮来源的肿瘤、胶质瘤等细胞系.结论:成功地表达纯化了CD112-Fc融合蛋白并建立了稳定分泌CD112 mAb的杂交瘤细胞株, 为CD112的功能研究打下坚实的基础.
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抗百日咳毒素单克隆抗体的制备及其特性鉴定
目的:制备抗百日咳毒素(PT)的单克隆抗体(mAb).方法:按常规细胞融合技术制备抗PT的mAb,并对其特异性、相对亲和力及中和活性等进行了鉴定.结果:获得7株分泌抗PT的mAb的杂交瘤细胞.7株mAb 的Ig亚类(型)均为IgG1 (κ),并能特异性识别PT,与百日咳丝状血凝素及C型肠毒素无交叉反应.其中2株mAb 1D4和3E4有中和抑制PT聚集CHO细胞的活性.Western blot的结果表明,2D7、5F9、5F8、1D4和2C2 5株mAb,均能识别PT抗原的S1亚单位蛋白,mAb 1B8可识别S2亚单位蛋白,mAb 3E4可识别S3亚单位蛋白.结论:成功地制备抗PT的mAb,经鉴定具有良好的特异性,为研制定量检测PT的ELISA试剂盒提供了制剂.
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用于构建抗人TNF嵌合抗体的鼠单克隆抗体中和活性的鉴定
目的: 筛选构建抗人TNF嵌合抗体所需高质量的鼠源性mAb. 方法: 从一组分泌抗人TNF mAb杂交瘤细胞中, 挑取3株D2、E6和F6, 按常规方法制备腹水.用饱和硫酸铵盐析后, 分别用蛋白A亲和层析和QFF阴离子交换层析法, 纯化D2株分泌的mAb(IgG2b)和E6和F6株分泌的mAb(均为IgG1).纯化前后, 3株mAb的效价, 采用间接ELISA法测定.纯化的3株mAb的中和活性, 通过它们对TNF诱导的L929细胞死亡和上调ECV304细胞上ICAM-1表达的抑制作用来进行鉴定.结果: 间接ELISA检测表明, 3株mAb D2、E6和F6纯化前的效价分别为1×10-6、1×10-7和1×10-7, 纯化后效价分别为0.01、0.002和0.002 mg/L.mAb中和活性的检测表明, 浓度为0.16、0.40和0.50 mg/L的D2、E6和F6, 可保护2×104 U/L TNF诱导的L929细胞半数不发生死亡.1.0 mg/L的mAb D2、E6和F6, 对2×105 U/L TNF使ECV304细胞上ICAM-1表达上调的抑制率, 分别为70.1%、60.1%和60.1%; 3株mAb的浓度降到0.1 mg/L时, 抑制率仍可达到60.1%、53.7%和59.0%.结论: 所选3株mAb的效价及中和活性均较高, 可作为抗人TNF嵌合抗体的候选mAb.
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抗BrdU单克隆抗体在凋亡细胞检测中的应用研究
目的探讨将自制的抗BrdU单克隆抗体(mAb)用于TUNEL法检测凋亡细胞的可能性.方法分别用TUNEL免疫荧光法和免疫组化技术,检测地塞米松诱导的凋亡胸腺细胞和射线照射的大鼠皮肤组织中的凋亡细胞.结果用TUNEL免疫荧光法和TUNEL免疫组化法法检测发现,凋亡细胞的细胞核分别呈明显的荧光或酶底物着色,而非凋亡细胞不显示荧光或无酶底物着色.结论该抗BrdUmAb用于TUNEL法,能够检测单个细胞标本或组织切片中的凋亡细胞,为国内开展凋亡细胞的检测,提供了一种新的方法.
