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抑制性受体LAIR-1对巨核谱系分化的调节作用
目的 研究抑制性受体LAIR-1在巨核谱系细胞的表达及其对巨核细胞分化的调节作用.方法 采用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测LAIR-1在巨核谱系细胞的表达；免疫磁珠法纯化脐血CD34+细胞,体外无血清培养系统诱导CD34+细胞向巨核细胞分化,观察LAIR-1被抗体或配体交联激活后对巨核细胞分化的影响.结果 LAIR-1表达于人骨髓CD34+ CD41a+和CD41a+ CD42b+细胞以及脐血CD34+ CD41a -和CD34+ CD41a+细胞；脐血CD34+细胞向巨核细胞分化过程中,LAIR-1表达在倍性为2N和4N的不成熟CD41a+细胞上；交联激活LAIR-1分子能够抑制脐血CD34+细胞向巨核细胞的分化.结论 LAIR-1可能是参与巨核细胞早期分化发育的一种新的负调控分子.
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口腔扁平苔藓患者外周血IL-10和调节性T细胞上LAIR-1的表达
目的：研究LAIR-1和IL-10在口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中的表达情况，为OLP致病机制提供理论依据。方法采用流式细胞术检测LAIR-1在口腔扁平苔藓（n＝22）和健康人（n＝22）外周血Treg上的表达水平，ELISA检测外周血中IL-10水平的变化。结果口腔扁平苔藓外周血CD4＋Foxp3＋Treg上LAIR-1阳性率高于健康人，血浆中IL-10的水平亦高于健康人（P＜0.05）。结论 LAIR-1和IL-10在口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中表达上调，提示两者可能在OLP的免疫发病机制中起了重要作用。
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白细胞相关免疫球蛋白样受体-1在宫颈癌和子宫内膜癌患者外周血T细胞的表达及意义
目的 研究白细胞相关免疫球蛋白样受体(LAIR-1)在宫颈癌和子宫内膜癌患者外周血T细胞的表达情况,并与子宫肌瘤、子宫癌前病变患者相比较,探讨LAIR-1表达与肿瘤免疫的相关性.方法 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,流式细胞术检测LAIR-1在196例肿瘤患者外周血T细胞的表达水平.结果 流式细胞术检测结果显示,宫颈癌和子宫内膜癌患者外周血CD3+CD4+T细胞LAIR-1阳性率均高于子宫肌瘤(P＜0.001;P＜0.05)和癌前病变患者(P ＜0.001;P ＜0.01).平均荧光强度分析结果显示,宫颈癌患者外周血CD3+CD4+T细胞LAIR-1表达水平显著高于癌前病变患者(P＜0.01),CD3+CD8+T细胞LAIR-1表达水平显著高于子宫肌瘤患者(P＜0.05)和癌前病变患者(P＜0.001).子宫内膜癌患者外周血CD3+CD4+T细胞LAIR-1表达水平明显高于子宫肌瘤患者(P＜0.05)和癌前病变患者(P＜0.01),CD3+CD8+T细胞LAIR-1表达水平高于癌前病变患者(P＜0.05).结论 LAIR-1在宫颈癌和子宫内膜癌患者外周血T细胞表达上调,提示LAIR-1可能与肿瘤免疫逃逸存在相关性.
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LAIR-1对人急性髓系白血病细胞HEL增殖、凋亡和迁移的影响
研究人白细胞相关免疫球蛋白样受体1(leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1,LAIR-1)对人红白血病细胞HEL增殖、凋亡和迁移的影响,探讨LAIR-1在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)中的作用.采用LAIR-1慢病毒表达载体(LV-LAIR-1)转染HEL细胞,建立稳定高表达LAIR-1的HEL细胞株,分别采用流式细胞术、激光扫描共聚焦显微技术、western blotting和RT-PCR鉴定LAIR-1分子的表达效率.采用CCK-8试剂盒、FITC Annexin V凋亡试剂盒和Transwell迁移实验分别检测LAIR-1对HEL细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响.实验结果显示,经LV-LAIR-1转染的HEL细胞高表达LAIR-1分子,阳性率达到85％以上;功能实验结果显示,与对照组细胞相比,LAIR-1能够显著抑制HEL细胞的增殖(P＜0.001),并且促进其凋亡(P＜0.01),但是对细胞迁移能力无明显影响(P＞0.05).上述研究结果显示,LAIR-1分子的表达能够影响人AML细胞的生物学功能.
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人工高表达LAIR-1对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖、凋亡和侵袭的影响
研究人白细胞相关免疫球蛋白样受体1(leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1,LAIR-1)对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,探讨LAIR-1的表达在肝癌中的作用.以LAIR-1慢病毒表达载体(LV-LAIR-1)转染SMMC-7721细胞,建立稳定高表达LAIR-1的细胞株LAIR-1+ SMMC-7721.采用流式细胞术(flow eytometry, FCM)、Western blotting、RT-PCR和激光扫描共聚焦显微技术(laser scanning confocal microscopy, LSCM)等方法鉴定LAIR-1分子在SMMC-7721细胞的表达水平;采用CCK-8试剂盒、FITC Annexin V凋亡试剂盒和Transwell侵袭实验分别检测LAIR-1对SMMC-7721细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.检测结果显示,经LV-LAIR-1转染的SMMC-7721细胞高水平表达LAIR-1分子;功能实验结果显示,与实验组细胞相比,LAIR-1的表达对细胞增殖无明显影响(P＞0.05),但是能够明显促进细胞凋亡(P＜0.05),并能够显著抑制细胞的侵袭能力(P＜0.05).上述研究结果提示,LAIR-1分子的表达可能是影响肝癌细胞生物学特性的一个重要因素.
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沉默LAIR-1表达对卵巢癌细胞增殖功能的影响
沉默白细胞相关免疫球蛋白样受体l(LAIR-1)在卵巢癌H08910细胞的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖功能的影响.构建LAIR-1的shRNA慢病毒表达载体,转染人浆液性卵巢癌细胞系H08910.RT-PCR和Western blot检测H08910细胞中LAIR-1分子的沉默效率;采用PI染色法和MTT法检测沉默LAIR-1表达对HO8910细胞周期及增殖功能的影响.成功建立沉默LAIR-1分子表达的稳定HO8910细胞株.与阴性对照组比较,转染LAIR-1-shRNA慢病毒载体的HO8910细胞中LAIR-1的mRNA及蛋白水平表达均明显降低(P＜0.05).LAIR-1-shRNA组G1期细胞数目明显低于CON组和NC-shRNA组(P＜0.05);沉默IAIR-1分子表达后,LAIR-1-shRNA HO8910细胞的增殖率明显高于NC-shRNA HO8910组和空白对照组(P＜0.05).沉默卵巢癌细胞HO8910 LAIR-1分子表达可明显增强细胞增殖的能力,提示卵巢癌细胞表达的LAIR-1可能对癌细胞的生物学功能发挥抑制作用.
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LAIR-1对巨核细胞系Dami生长分化的影响作用
研究LAIR-1在巨核细胞系Dami上的表达,及其表达对细胞生长分化的影响,为深入研究LAIR-1在巨核细胞造血中的功能奠定基础.采用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测LAIR-1分子的表达；应用CCK-8法、AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测LAIR-1对细胞增殖及凋亡的影响；应用PI染色流式细胞术检测LAIR-1对细胞倍性的影响.结果:LAIR-1在Dami细胞膜上低水平表达,PMA可以显著刺激其表达；应用特异性抗体或配体交联LAIR-1分子,与对照组相比,细胞的增殖降低、凋亡增多、分化过程中2N和4N的细胞较多、细胞上CD41a和CD42b的表达降低.提示,PMA可以显著诱导LAIR-1在Dami细胞上的膜表达；LAIR-1的表达抑制Dami细胞的增殖,刺激其凋亡,阻碍细胞核内DNA的复制,抑制细胞上CD41a和CD42b的表达.
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夹心ELISA检测可溶型LAIR-1方法的建立及其应用的研究
为了探讨血清可溶型白细胞相关免疫球蛋白样受体1(sLAIR-1)的水平与疾病的关系,用生物传感器鉴定了3种抗LAIR-1分子胞膜外区mAb识别的表位,并应用2种识别不同LAIR-1表位的mAb首次建立了检测sLAIR-1的夹心ELISA方法,其检测灵敏度达到1.5μg/L.以此方法检测了活化的人PBMC培养上清以及正常人和肾综合征出血热(HFRS)患者血清中sLAIR-1的水平.在经PMA、PHA、LPS和抗CD3 mAb活化的人PBMC细胞培养上清中检测到sLAIR-1.24例正常人血清sLAIR-1的平均水平为(6.2±3.3)μg/L,62例HFRS患者血清sLAIR-1的平均水平为(47.2±35.9)μg/L.证明体内和体外存在天然sLAIR-1.HFRS患者血清sLAIR-1水平明显升高.为进一步研究LAIR-1分子的免疫调节功能及其在临床免疫中的应用提供了新的手段.
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白细胞相关免疫球蛋白样受体-1在破骨细胞发育中的作用
目的 研究白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(LAIR-1)在破骨细胞(0C)发育过程中的表达规律及影响.方法 PCR检测小鼠LAIR-1(mLAIR-1)分子在体外诱导OC生成过程中mRNA水平的变化；重酒石酸盐抗性酸性磷酸酶(TRAP)染色观察OC的数量；Coming Osteo Assay surface检测OC骨吸收陷窝的形成；ELISA检测类风湿性关节炎(RA)患者血清可溶型LAIR-1(sLAIR-1)与疾病的炎症状态和活动度是否相关.结果 PCR结果显示在OC形成过程中,LAIR-1 mRNA显著降低；TRAP染色和骨吸收陷窝实验均显示加入mLAIR-1单克隆抗体后,OC数量明显减少.RA病人类风湿因子高低水平组之间的血清sLAIR-1水平存在显著差异.结论 LAIR-1分子可能参与了OC的发育过程,并且与RA疾病的炎症状态有一定关系.
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LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)与配体结合亲和力的比较
目的:LAIR-1/LAIR-2(CD305/306)与配体结合亲和力的比较.方法:应用不同浓度混合的LAIR-1和LAIR-2融合蛋白,同时或先后与配体表达细胞孵育后,用特异性LAIR-1或LAIR-2单克隆抗体(mAb)进行免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析,比较LAIR-1和LAIR-2融合蛋白与细胞结合的百分率的变化及相互竞争情况.结果:LAIR-1和LAIR-2膜型配体的分布较广泛,人和小鼠LAIR受体与配体的结合具有相互交叉的特点.LAIR-2能够明显阻断LAIR-1与其膜型配体的结合,而LAIR-1对LAIR-2与其配体的结合无影响.结论:LAIR-1和LAIR-2可能结合相同的膜型配体,但LAIR-2结合配体的亲和力明显高于LAIR-1结合的亲和力.此结果为深入探讨LAIR家族免疫调节的分子机制提供重要的实验依据.
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LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)推定配体分布的研究
目的: 研究LAIR-1(CD305)及LAIR-2(CD306)推定配体在多种细胞系上的分布,为鉴定LAIR-1/LAIR-2推定配体提供了实验依据.方法:建立稳定表达LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白的细胞系.以纯化的融合蛋白进行活细胞免疫荧光染色,用流式细胞仪检测LAIR-1及LAIR-2推定配体在多种细胞系膜表面的表达,并比较LAIR-1和LAIR-2推定配体的分布及可能结合的位点.结果:LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体均在人羊膜来源的上皮细胞系WISH上高表达,在人黑色素瘤细胞系C32、人胚肾上皮细胞系293T及人脐静脉内皮细胞系ECV304上有一定程度的表达.LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白与推定配体的结合,可分别被可同时识别LAIR-2和LAIR-1的单克隆抗体(mAb)FMU-LAIR-2.2和FMU-LAIR-2.1阻断.结论:LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体的分布基本一致,主要表达于WISH、 C32、293T和ECV304细胞系.LAIR-1和LAIR-2可能拥有共同的配体.
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肿瘤患者外周血中抑制性受体LAIR-1表达升高
目的:研究LAIR-1在肿瘤患者中的表达,探讨其在抗肿瘤免疫应答中的作用.方法:应用夹心ELISA检测肿瘤患者血清中可溶型sLAIR-1的水平;应用免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察LAIR-1在患者PBMC中NK细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和B细胞上的表达.结果:肿瘤患者血清sLAIR-1水平为(4.6±3.2) μg/ L,明显高于正常人血清sLAIR-1 水平(3.9±3.0) μg/L,P<0.05.NK细胞,CD4+ T细胞及CD8+ T细胞表达LAIR-1水平上调.肺癌患者CD4/CD8比值明显低于正常人,B细胞百分率明显高于正常人.NK细胞、CD4+ T细胞CD8+ T细胞中LAIR-1的表达阳性率高于对照组.结论:在肿瘤患者LAIR-1分子表达水平高于正常人.肿瘤患者抑制性受体LAIR-1 表达水平的上调可能与肿瘤的免疫逃逸有关.
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9.1C3/LAIR-1的真核表达、纯化及单克隆抗体的制备和鉴定
目的表达并纯化9.1C3/LAIR-1胞膜外区与人的IgG1 Fc段的融合蛋白, 制备针对9.1C3/LAIR-1胞膜外区的单克隆抗体(mAb).方法构建真核表达载体pIg/3C-9.1C3/LAIR-1, 表达并纯化9.1C3/LAIR-1-Fc融合蛋白.以9.1C3/LAIR-1-Fc融合蛋白免疫BALB/c小鼠, 制备.以间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性, 以竞争结合实验鉴定mAb识别 LAIR-1的表位.结果表达并纯化了9.1C3/LAIR-1-hIgFc融合蛋白, 以其免疫BALB/c小鼠, 获得1株针对9.1C3/LAIR-1胞膜外区的mAb 4H7.4H7对HL-60细胞和经9.1C3/LAIR-1 cDNA转染的COS7细胞上的表位识别, 与已报道的抗9.1C3 mAb体不同.结论成功地构建了9.1C3/LAIR-1胞膜外区基因的真核表达载体, 并表达纯化了9.1C3/LAIR-1-hIgFc融合蛋白.获得一株针对9.1C3/LAIR-1胞膜外区的mAb, 为进一步研究9.1C3/LAIR-1分子的结构和功能提供了新的手段.
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可溶型LAIR-1分子在冠心病患者血清中的ELISA检测
白细胞相关免疫球蛋白样受体1(leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor-1,LAIR-1)为Ⅰ型跨膜糖蛋白,属免疫球蛋白超家族(IgSF)成员,1983年首先发现9.1C3/LAIR-1参与杀伤细胞的功能[1],1997年基因克隆成功[2].
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LAIR-1与 TGF-β在口腔扁平苔藓患者外周血中表达的相关性研究
目的：研究 LAIR-1和 TGF-β在口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中的表达情况，探讨 LAIR-1和 TGF-β对 OLP 患者免疫功能的影响。方法：采用流式细胞术检测 LAIR-1在 OLP 患者（n ＝22）和健康人（n ＝22）外周血 Treg 上的表达水平， ELISA 检测外周血 TGF-β的水平。结果：OLP 患者外周血 CD4＋Foxp3＋Treg 上 LAIR-1阳性率高于健康人，TGF-β的水平亦高于健康人，LAIR-1在 CD4＋Foxp3＋Treg 上的表达水平和 TGF-β的水平呈正相关（r ＝0．43，P ＜0．05）。结论：LAIR-1和TGF-β在 OLP 患者外周血中表达上调，提示 LAIR-1和 TGF-β可能参与了 OLP 的发病。
