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9.1C3/LAIR-1的真核表达、纯化及单克隆抗体的制备和鉴定
目的表达并纯化9.1C3/LAIR-1胞膜外区与人的IgG1 Fc段的融合蛋白, 制备针对9.1C3/LAIR-1胞膜外区的单克隆抗体(mAb).方法构建真核表达载体pIg/3C-9.1C3/LAIR-1, 表达并纯化9.1C3/LAIR-1-Fc融合蛋白.以9.1C3/LAIR-1-Fc融合蛋白免疫BALB/c小鼠, 制备.以间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性, 以竞争结合实验鉴定mAb识别 LAIR-1的表位.结果表达并纯化了9.1C3/LAIR-1-hIgFc融合蛋白, 以其免疫BALB/c小鼠, 获得1株针对9.1C3/LAIR-1胞膜外区的mAb 4H7.4H7对HL-60细胞和经9.1C3/LAIR-1 cDNA转染的COS7细胞上的表位识别, 与已报道的抗9.1C3 mAb体不同.结论成功地构建了9.1C3/LAIR-1胞膜外区基因的真核表达载体, 并表达纯化了9.1C3/LAIR-1-hIgFc融合蛋白.获得一株针对9.1C3/LAIR-1胞膜外区的mAb, 为进一步研究9.1C3/LAIR-1分子的结构和功能提供了新的手段.
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9.1C3对CD2和CD3诱导的杀伤作用的影响及其机制探讨
目的探讨9.1C3分子对CD2和CD3诱导的PBMC杀伤作用的影响及其作用机制.方法以活化PBMC为效应细胞,采用重导向杀伤实验(redirected cytotoxicity assay,RCA),观察9.1C3对CD2、CD3介导效应细胞杀伤P815细胞作用的影响.以Jurkat细胞为模型,用相应的抗体刺激细胞,通过荧光分光光度计,测定9.1C3对CD2、CD3诱导i升高的影响.结果 9.1C3 mAb能显著抑制CD2 mAb介导活化PBMC对P815细胞的杀伤作用,但对CD3 mAb介导杀伤的抑制作用较弱.以Jurkat细胞为模型,发现CD2 mAb经羊抗鼠Ig(goat anti mouse Ig, GAM Ig)交联后能诱导i的升高,当同时加入9.1C3 mAb时,i的升高受到抑制;CD3 mAb在没有GAM Ig交联时即能引起i的升高,而9.1C3 mAb对CD3 mAb诱导i的升高有赖于GAM Ig的交联.结论 9.1C3分子对CD2和CD3介导的杀伤的抑制程度不同.抑制杀伤细胞脱颗粒依赖的i升高可能是9.1C3分子抑制活化型受体CD2介导细胞毒作用的作用机制之一.
