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MAPK/ERK信号通路调节K562细胞中mdr1基因的诱导性表达
目的 观察多柔比星(doxorubicin,DOX)诱导K562细胞mdr1基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的作用,探讨mdr1基因的转录调控机制.方法 多柔比星初始浓度为0.01 μg/ml,诱导K562细胞24 h后撤药继续培养至细胞状态恢复,加入多柔比星继续诱导24 h,浓度增加为0.02μg/ml.依上述方法 多柔比星浓度逐渐增加,直至0.05μg/ml.收集DOX浓度为0.01、0.03和0.05μg/ml时的细胞.RT-PCR检测mdr1基因表达,流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白(P-gP)的表达,Western blot 检测ERK活化情况.MAPK的抑制剂PD98059预处理K562细胞1 h后与多柔比星共同作用,逆转录(RT)-PCR和流式细胞仪分别检测mdr1基因和P-gP的表达情况.结果 经多柔比星作用后K562细胞中ERK磷酸化增强,同时mdr1基因转录上调,及其蛋白产物P-gP的表达也增加,当多柔比星浓度为0.05μg/ml时两者的表达均增加了5倍之多.而用PD98059预处理细胞后能明显抑制多柔比星诱导mdr1基因转录和蛋白表达,多柔比星浓度为0.03μg/ml时PD98059对mdr1基因表达的抑制率为(74.1±0.11)%,多柔比星浓度为0.05 μg/ml时抑制率为(70.2±0.14)%.结论 多柔比星能够诱导K562细胞mdr1基因表达,同时激活MAPK/ERK信号通路,阻断ERK的活化能抑制mdr1基因的诱导性表达.
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c-jun氨基末端激酶与多药耐药蛋白在胃癌组织中的表达及其意义
目的 研究c-jun氨基末端激酶(e-jun N-terminal kinase,JNK)的磷酸化活性形式p-JNK与多药耐药蛋白P糖蛋白(p-glycoprotein,P-gP)、多药耐药相关蛋白1(multidrng resistance associated proteinl,MRP1)和肺耐药相关蛋白(lung resistance protein,LRP)在胃癌组织中的表达及p-JNK在胃癌耐药中的作用.方法 通过免疫组化方法研究168例胃癌和27例正常胃组织的组织芯片中p-JNK和P-gP、MRP1、LRP的表达及其关系.结果 p-JNK和耐药蛋白P-gP、MRP1、LRP在胃癌组织中的阳性表达率分别为45.8%、51.8%、45.8%和55.4%,均明显高于在正常胃组织中的表达.p-JNK与肿瘤大小、浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移和远处转移显著相关.p-JNK与P-gP和MRPl表达正相关(P＜0.01).Kaplan-Meier分析显示p-JNK和P-gp、MRP1阳性组的预后较阴性组差(P＜0.01).结论 p-JNK高表达参与胃癌的恶性生物学行为,通过上调耐药蛋白P-gp和MRP1的表达参与胃癌化疗耐药的形成;p-JNK可成为评价胃癌预后和耐药的有价值指标.
