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乙型肝炎病毒全S蛋白与纤维蛋白原α链的相互作用
目的:筛选人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎病毒(HBV)全S蛋白相互作用蛋白的基因,并反向验证HBV全S蛋白候选结合蛋白之间相互作用.方法:将全S基因定向克隆到酵母表达栽体pDEST 32,构建正向筛选的诱饵质粒并Western b1ot法验证其在酵母中的表达.将诱饵质粒与人肝细胞cDNA文库质粒共同转化MaV203酵母细胞,在人肝细胞cDNA文库筛选候选结合蛋白,提取阳性茵落质粒测序.并分析其生物学性质.将筛选出的纤维蛋白原α链中下游序列及不同全S变异株基因,分别定向克隆到pDEST32及pDEST22载体中,利用Western blot法验证表达.将诱饵质粒与猎物质粒共同转化MaV203酵母细胞,以反向酵母双杂交方法验证初筛结果的可靠性及正确性.结果:正向的酵母双杂交实验,经初筛和再转染实验纤维蛋白原α链可与HBV全S蛋白发生相互作用.再以纤维蛋白原α链为靶基因设计诱饵质粒,以四种变异的HBV全S蛋白为靶基因设计猎物质粒,反向酵母双杂交法证实维蛋白原α链中下游可与不同全S变异体(总差异率2%)发生相互作用,纤维蛋白原α链与全S蛋白的结合域可能为病毒蛋白的前268aa.结论:纤维蛋白原β链中下游可与HBV全S蛋白产生特异性结合,其结合域可能与病毒蛋白的前268aa产生相互作用.
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绝经后女性乳腺癌与体内IGFBP2、FGA表达上调的关系及意义
目的 对乳腺癌患者外周血标本进行蛋白质水平筛查分析,明确女性乳腺癌发生及绝经前后与IGFBP-2和FGA表达调控的关系,为建立乳腺癌早期预警及临床治疗疗效评估指标提供依据.方法 收集病理确诊为乳腺癌的患者和健康志愿者外周血标本共85例,其中绝经后患者29例,未绝经患者36例,正常对照20例.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测外周血(血浆)胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP2)和纤维蛋白原α链(fibrinogen alpha chain,FGA)含量.结果 绝经后乳腺癌患者体内IGFBP-2含量升高,与未绝经患者和正常对照有显著差异(P<0.05).正常对照组患者血浆FGA含量低于未绝经及绝经后乳腺癌患者(P<0.05).未绝经乳腺癌与绝经后乳腺癌患者之间,FGA含量也存在显著差异(P<0.05).受信者操作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析显示,血浆IGFBP-2和FGA表达水平均有较高的灵敏度和特异性.结论 绝经后和未绝经乳腺癌患者伴有血浆IGFBP-2与FGA含量升高,可能与乳腺癌IGFBP-2、FGA蛋白质的表达调控异常存在内在联系,此为进一步揭示乳腺癌发病机制、 早期预警和临床治疗疗效评估提供依据.
关键词： 乳腺癌 胰岛素样生长因子结合蛋白2 纤维蛋白原α链 外周血 酶联免疫吸附法
