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荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法在临床的应用评价
目的:对国产荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH-PCR-MC)检测乙型肝炎病毒聚合酶酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸基序(HBV YMDD)变异的试剂进行临床应用评价.方法:慢性乙型肝炎患者外周血浆标本217份,分别采用荧光标记Taqman探针定量PCR法(FT-PCR)和荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH-PCR-MC)检测HBV DNA含量和YMDD及其变异;其中78份HBVDNA阳性标本采用基因型特异性多引物对巢式PCR法进行基因分型(A-F),30份标本用PCR产物克隆测序法检测HBV YMDD及其变异.结果:血浆标本HBV DNA阳性率(≥1.0×106copies/L)为75.6%(164/217).YMDD及其变异检出率为67.7%(147/217),其中YMDD 44.9%(66/147),YIDD 225%(33/147),YVDD 17.7%(26/147),YIDD/YVDD混合株10.9%(16/147),其他混合株4.0%(6/147);结合HBV DNA含量,HBV YMDD及其变异的检出下限为HBV DNA=5.0×106copies/L,但在106copies/L时检出率较低,仅为36.4%,随着HBV DNA含量增高,检出率显著增高(＞80%),且在107copies/L时即有显著增高(x2=7.177,P＜0.01).在基因分型的78份标本中,C基因型占89.8%,B和D基因型分别占8.9%和1.3%,YMDD及其变异总检出率为100%,变异总检出率为59.0%;1份D基因型YMDD及其变异检测为YIDD/YVDD混合变异;B,C两种基因型变异检出率分别为71.4%和55.7%,但二者无统计学差异.以测序法的检测结果为相对标准,则FH-PCR-MC法检测HBV YMDD及其变异的相对敏感性、特异性和符合率分别为96.3%(26/27),100%(3/3)和96.7%(29/30);对于HBV YMDD及其变异的类型,两种方法检测结果一致.结论:FH-PCR-MC法是一种快速、特异的HBVYMDD及其变异检测方法,具有较高的检出率,且能区分YMDD及其变异的类型.
关键词： 荧光标记 杂交双探针 多聚酶连反应 融解曲线法 乙型肝炎病毒YMDD
