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血管紧张素Ⅱ对肝星状细胞TIMP-1表达的作用
目的:研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肝星状细胞组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)表达的作用.方法:体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,分别加入不同浓度的AngⅡ(1-6-10-9mol/L)和AngⅡ10-6moL/L+Losartan10-6mol/L,作用48 h后收集细胞,RT-PCR检测各组TIMP-1 mRNA表达水平.结果:10-6moL/L AngⅡ和10-7moL/L AngⅡ作用的HSCT6细胞TIMP-1 mRNA的表达分别为0.79±0.04和0.83±0.06,显著高于空白对照组0.62±0.08(P＜0.05),10-6AngⅡ+10-6 Losartan组TIMP-1 mRNA的表达为0.64±0.06,显著抑制10-6 moL/L AngⅡ的作用(P＜0.05).结论:AngⅡ可通过AT1受体促进HSC-T6细胞TIMP-1的表达.
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重组大鼠肝再生增强因子对肝星状细胞株IG12的作用
目的观察重组大鼠肝再生增强因子(ALR)对肝星状细胞株IG12增殖及细胞外基质合成的影响,探讨其抗肝纤维化作用的可能机制.方法利用DNA重组技术构建大鼠ALR原核表达质粒PGEX2T-alr,转导XL-1经IPTG诱导ALR表达,用SDS/PAGE纯化获得重组肝再生增强因子(rALR).利用胶原酶灌注梯密度离心分离肝星状细胞,用有限稀释法建立大鼠肝星状细胞株IG12.于体外观察rALR对IG12及大鼠成纤维细胞株WFB增殖及细胞外基质合成的影响.结果 rALR可显著抑制IG12的增殖及其细胞外基质的合成;但对大鼠成纤维细胞株WFB的增殖无显著抑制作用,能抑制WFB产生细胞外基质.结论原核细胞产生的rALR具有生物学活性,它能抑制大鼠肝肌纤维样细胞IG12的增殖及细胞外基质的产生;对鼠成纤维细胞株WFB的增殖无显著抑制作用,能抑制WFB产生细胞外基质.
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抑制p70S6K对HSC-T6增殖活化的作用研究
目的 研究抑制核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(p70S6K)的表达对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)增殖活化的影响.方法 建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,观察磷酸化p70S6K在纤维化肝组织中的表达变化;利用雷帕霉素抑制p70S6K蛋白表达,及靶向p70S6K基因的siRNA预处理HSC-T6,再添加重组小鼠血小板衍生生长因子(PDGFBB)诱导,观察HSC-T6的增殖活化情况;利用Western blot、RT-PCR检测p70S6K、P-p70S6K、α-SMA、Collagen Ⅰ的蛋白和基因表达水平.结果 CCl4诱导大鼠肝纤维化模型组磷酸化p70S6K蛋白明显升高;雷帕霉素预处理HSC-T6,明显降低了p70S6K的磷酸化水平,并抑制了PDGF-BB诱导的细胞增殖及α-SMA、Collagen Ⅰ的表达;siRNA转染HSC-T6,在基因和蛋白水平抑制了p70S6K的表达,同时减少了PDGF-BB诱导的α-SMA、Collagen Ⅰ、P-p70S6K的表达.结论 用siRNA和雷帕霉素阻断p70S6K的表达,在一定程度上可以抑制HSC-T6的增殖和活化,为肝纤维化的防治研究提供新的思路和靶点.
