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稳定干扰Pin1基因的食管癌细胞株的筛选及其生物学特征
目的:筛选稳定干扰Pin1的食管癌细胞系,研究Pin1表达与食管癌细胞生物学特征的关系.方法:将针对Pinl1基因的shRNA(pmU6-Pin1)转染入EC1细胞,经G418加压筛选稳定表达Pin1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹法检测细胞中Pin1的表达,确定筛选细胞系的正确性.通过MTT实验以及流式细胞仪检测Pin1抑制对食管癌细胞增殖、凋亡的影响.结果:Western blot检测结果显示,Pinl蛋白表达被成功抑制,建立了稳定表达Pin1小干扰RNA的细胞株(shPin1).与正常EC1细胞比较,MTT实验和流式细胞术实验结果表明基因沉默Pin1抑制食管癌细胞增殖(抑制率为51.8%),诱导细胞凋亡(凋亡率为46.39%):并增加了食管癌细胞EC1对顺铂的敏感性,抑制食管癌细胞增殖以及诱导细胞凋亡的能力均有所增强,抑制率从23.5%上升到61.0%,凋亡率从26.10%上升到58.95%.结论:稳定干扰Pin1食管癌细胞系的建立为进一步研究Pin1在食管癌中的作用提供了研究平台:基因沉默Pin1增加了食管癌细胞对顺铂的敏感性.
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siRNA靶向稳定干扰HDGF基因胃癌细胞株的建立
目的 构建针对肝癌衍生生长因子(HDGF)基因的siRNA表达载体,建立稳定干扰HDGF表达的胃癌细胞株. 方法 常规聚合酶链反应(PCR)检测HDGF基因在胃癌SGC-7901细胞株的表达情况.构建重组靶向HDGF shRNA慢病毒表达质粒pLentiU6/ HDGFshRNA,用脂质体转染的方法将载体导入胃癌细胞株.经杀稻瘟菌素筛选后,建立稳定表达siRNA的细胞株.荧光定量PCR检测干扰效率. 结果 在胃癌SGC-7901细胞株中,HDGF显示高表达.测序验证pLentiU6/HDGFshRNA重组质粒构建成功;在将干扰表达质粒稳定转染入胃癌细胞株后能明显抑制HDGF mRNA表达水平. 结论 成功构建了pLentiU6/HDGFshRNA慢病毒重组质粒,建立了稳定靶向干扰HDGF表达的siRNA胃癌细胞株.
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Serglycin稳定干扰对鼻咽癌高转移细胞顺铂敏感性的影响及机制研究
目的：观察鼻咽癌高转移细胞5－8f的顺铂敏感性受Serglycin稳定干扰的影响，并对干扰机制进行初步探究。方法：建立Serglycin 稳定干扰的鼻咽癌高转移细胞株，分为三组：实验组5－8f KDA和5－8f KDC及对照组5－8f scrambled。测定Serglycin蛋白的表达情况；观察亲代及稳定株细胞形态；MTT法检测吸光度，绘制顺铂作用下的增殖曲线；测定细胞存活率；测定干细胞基因表达量；测定Vimentin 与 E－cadherin 含量。结果：实验组Serglycin基因表达被抑制，对照组Serglycin基因表达较多，差异具有统计学意义（P＜0．05）。实验组的分泌性Serglycin蛋白明显减少，对照组的Serglycin分泌蛋白表达较多。稳定组细胞形态呈圆形或多边形，对照组细胞为长梭形。MTT检测发现癌细胞受顺铂作用后第三天开始，对照组细胞吸光度增加较稳定组细胞明显快，差异有统计学意义（P＜0．05）。与5－8f scrambled组相比，实验组的细胞存活率明显下降，差异具有统计学意义（P＜0．05）。稳定组细胞干细胞基因表达明显降低，差异具有统计学意义（P＜0．05）。肿瘤组织中 Serglycin 能促进Vimentin 蛋白的表达，抑制E－cadherin 蛋白的表达。结论：Serglycin 稳定干扰可以增加鼻咽癌高转移细胞对顺铂的敏感性。
