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抑制端粒酶活性能增加胃癌细胞对顺铂的敏感性
肿瘤细胞存在多药耐药现象和化疗药物的毒副作用是影响肿瘤化疗效果的主要原因.新近研究表明,表达于绝大多数肿瘤细胞而不表达于正常体细胞的端粒酶与化疗敏感性有关[1,2].在我们既往研究工作的基础上,我们观察了反义人端粒酶RNA(hTR)转染的SGC-7901胃癌细胞在端粒酶活性受抑制后对常用化疗药物顺铂敏感性的变化,探索胃癌联合化疗的新途径.
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沉默MACC1基因表达对顺铂耐药的卵巢上皮性癌细胞顺铂敏感性的影响
结肠癌转移相关基因1（metastasis-associated in colon cancer 1，MACC1）异常表达于结肠癌、胃癌、肝癌、卵巢上皮性癌（卵巢癌）等多种恶性肿瘤中，可能与上述恶性肿瘤的发生、发展密切相关[1-5]。有研究显示，在前列腺癌细胞中采用小分子干扰RNA（siRNA）抑制MACC1基因的表达，可增加前列腺癌细胞对吉西他滨的敏感性，其作用可能与抑制Ras/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路的活性有关[6]。本研究利用短发夹状RNA（shRNA）沉默MACC1基因表达后，观察顺铂耐药的卵巢癌细胞系A2780/DDP、COC1/DDP细胞对顺铂敏感性的变化，探讨MACC1基因与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系及其可能的分子机制。
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米非司酮对子宫颈癌SiHa细胞增殖及其顺铂敏感性的影响
米非司酮为强效孕激素及糖皮质激素拮抗剂,广泛用于终止早中期妊娠、扩张宫颈和紧急避孕等.随着对其深入研究发现,米非司酮在脑脊膜瘤、子宫平滑肌瘤、子宫内膜癌等的治疗中起着积极作用[1].本研究探讨了米非司酮对宫颈癌SiHa细胞增殖及其顺铂敏感性的影响,并探讨其可能机制.
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吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对子宫颈癌细胞顺铂敏感性的影响
多个随机临床试验的结果肯定了化疗对控制局部晚期宫颈癌的作用,以顺铂为基础的同步放化疗可提高宫颈癌的生存率,可使宫颈癌死亡危险下降50%~([1]).但化疗中耐药的出现是棘手的问题,寻求增加化疗药物敏感性的研究对提高宫颈癌化疗的疗效有重大意义.
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脱氧氟尿苷用于提高人卵巢癌细胞株对顺铂敏感性的研究
肿瘤细胞减灭术及术后化学药物治疗(化疗)是目前治疗卵巢癌的主要手段,以铂类为基础的联合化疗明显改善了晚期卵巢癌患者的治疗效果,但耐药性的产生严重影响其化疗效果.本研究采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、免疫细胞化学链霉菌抗生物素-过氧化物酶连接(SP)法和流式细胞术等方法,分析了脱氧氟尿苷(FUDR)作用后卵巢癌细胞株CAOV3对顺铂敏感性的变化,并初步探讨其机理,为临床制定有效的联合化疗方案提供理论依据.
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去甲斑蝥素调控YAP增强A549细胞对顺铂的敏感性
目的 探讨去甲斑蝥素联合顺铂调控A549细胞对顺铂敏感性和增殖能力的影响,以及YAP分子是否参与这一过程.方法 以A549细胞为实验对象,通过RT-PCR、West-ern blot和免疫荧光实验检测活化的 caspase-3、Annexin V、YAP及YAP靶基因 CTGF和 Cyr61的表达水平;CCK-8和MTT实验检测各药物对细胞的增殖抑制率;荧光素报告基因实验检测各药物对YAP转录活性的影响.结果 原癌基因YAP在肺癌细胞中高表达且处于活化状态,高表达的YAP促进肺癌细胞增殖.高浓度的去甲斑蝥素和顺铂能明显降低A549细胞的增殖能力,然而低浓度的顺铂和去甲斑蝥素的联合用药可通过调控YAP,增加A549细胞对顺铂的敏感性,进而抑制细胞增殖.结论 低浓度的去甲斑蝥素和顺铂的联合用药增加A549细胞对顺铂的敏感性,明显降低YAP的转录活性和YAP的蛋白水平,降低其靶基因 CTGF和Cyr61的表达水平,从而抑制细胞增殖.
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糖原合成酶激酶3β对顺铂治疗肺癌敏感性的影响
目的 通过构建高表达糖原合成酶激酶3β( GSK 3β)的肺癌A549细胞转基因细胞模型,探讨GSK 3β对顺铂治疗肺癌敏感性的影响.方法 RT-PCR方法扩增目的基因GSK 3β;分子克隆技术构建哺乳动物细胞表达载体；脂质体Lipofectamine2000转染A549细胞；Western blot验证A549-GSK 3β稳定株；采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MIT法)检测细胞存活率,绘制生长曲线.结果 A549-GSK 3β转染组对顺铂半数存活浓度(IC50)值为2.2,相比A549-vector组(4.2)和A549组(4.3)差异有统计学意义(P＜0.05).结论 GSK3β与顺铂有协同效应,可以提高肺癌肿瘤细胞对顺铂的敏感性,为肺癌治疗提供了新思路.
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胰岛素抵抗对卵巢癌细胞生物学功能及顺铂敏感性的影响
目的 探讨胰岛素抵抗对卵巢癌细胞生物学功能及顺铂敏感性的影响.方法 选取卵巢癌患者200例,根据是否惠有2型糖尿病分为两组,胰岛素抵抗组83例、非胰岛素抵抗组127例.穿刺获取肿瘤组织和正常组织作为实验对象,采用免疫组化法测定IGF-1蛋白表达量,流式细胞术法测定IGF-1R蛋白表达量,MTT法测定不同浓度顺铂作用于肿瘤细胞的IC50(半数抑制浓度)值.结果 ①胰岛素抵抗组IGF-1蛋白表达的HIS值为10.1±1.68,与非胰岛素抵抗组(6.5±2.14)比较,明显较高,差异有统计学意义(P＜0.05);②胰岛素抵抗组IGF-1R蛋白表达量为(281.1±1.78),与非胰岛素抵抗组(264.6±5.32)比较,明显较高,差异有统计学意义(P＜0.05);③胰岛素抵抗组不同浓度顺铂作用于肿瘤细胞的IC50值为(14.93 ±0.15),与非胰岛素抵抗组(2.41 ±0.08)比较,明显较高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胰岛素抵抗能够促进卵巢癌细胞增殖,降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,对临床用药具有指导意义,值得临床推广.
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沉默MACC1的表达对卵巢癌细胞系SKOV-3顺铂化疗敏感性的影响
目的:探讨沉默结肠癌转移相关基因1(MACC1)对卵巢癌上皮性癌细胞SKOV-3顺铂化疗敏感性的影响.方法:SKOV-3细胞分为shRNA转染组(重组质粒psuper-EGFP-s3转染)、空质粒转染组(psuper-EGFP-neo转染)和对照组(未作转染),采用RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞MACC1 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞对顺铂的耐药性.结果:3组SKOV-3细胞MACC1 mRNA和蛋白表达比较,差异有统计学意义(P＜0.05),shRNA转染组较未转染组和空质粒组下降.shRNA转染组对顺铂的IC50较对照组和空质粒转染组下降(P＜0.05).结论:沉默MACC1的表达能增加卵巢癌SKOV-3细胞对顺铂的敏感性.
关键词： 结肠癌转移相关因子1 RNA干扰 顺铂敏感性 卵巢癌 SKOV-3细胞 -
miR-26a通过NRAS和E2FE途径增强胃癌细胞对顺铂敏感性的研究
目的：探讨miR-26a通过NRAS和E2FE途径增强胃癌细胞对顺铂的敏感性。方法实时定量PCR检测miR-26a在顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP和非耐药SGC-7901细胞株中的表达；MTS法分析miR-26a对顺铂敏感性的影响；膜联蛋白/碘化丙啶（PI）双染色法和流式细胞仪检测调亡。荧光素酶报告性分析和基因检测鉴定miR-26a靶标；另外，MTS和细胞凋亡分析评估NRAS和E2F2化疗的敏感性。结果与SGC-7901细胞比，miR-26a在SGC-7901/DDP中的表达降低。运用功能获得和失活实验分析，证实了miR-26a能增强胃癌细胞对顺铂的敏感性。同时发现NRAS和E2F2的3′-UTR端存在miR-26a靶位点，且miR-26a能下调NR S和E2F2的表达。此外敲除NRAS或E2F2可增加胃癌细胞对顺铂敏感。结论通过miR-26a的靶标NRAS和E2F2能增强胃癌细胞对基于顺铂化疗的敏感性；同时，证明了miR-26a可作为胃癌化疗的潜在增敏剂。
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EZH2基因与卵巢癌细胞系A2780化疗敏感性的关系
目的:探讨RNA干扰沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因与卵巢癌细胞A2780顺铂敏感性的关系.方法:获得稳定表达EZH2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的人卵巢癌细胞A2780-shEZH2,实时定量PCR(Real time RT-PCR)法和免疫印记法检测转染株的EZH2基因表达,MTT法检测细胞对顺铂的耐药性,流式细胞学检测细胞凋亡.结果:以未转染组A2780细胞EZH2的表达水平为100%,EZH2-shRNA转染组A2780-shEZH2细胞EZH2的mRNA及蛋白水平分别下降90.20±1.66%和76.54±8.92%,与未转染组比较差异均有高度统计学意义(P<0.01).EZH2-shRNA转染组A2780-shEZH2细胞对顺铂的IC50与未转染组A2780细胞IC50值和空质粒转染组A2780-shVector细胞IC50值比较,差异无统计学意义(P>0.05).EZH2-shEZH2转染组的细胞凋亡率与空质粒转染组凋亡率及未转染细胞凋亡率相比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:EZH2基因与卵巢癌原发性顺铂耐药无关.
关键词： 果蝇zeste基因增强子同源物2基因 顺铂敏感性 RNA干扰 -
p53反义RNA对人肺癌细胞表型和顺铂敏感性的影响
目的研究外源p53反义RNA对有p53基因248密码点突变的人肺癌细胞系恶性表型和顺铂敏感性的影响.方法构建p53反义RNA真核细胞表达载体PEGFP-p53(AS),经酶切图证明反向联结质粒.Lipofectin介导转染有p53基因248密码点突变的人肺癌细胞系801D,经G418筛选获耐受克隆.稀释法建立单细胞克隆系,应用PCR检测外源基因,荧光显微镜检测细胞绿色荧光蛋白表达,p53单抗免疫组化染色检测p53突变蛋白表达,体外集落形成实验检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞周期,MTT法检测细胞对顺铂药物敏感性.结果酶切图证明了p53-cDNA反向联结于质粒,构建了PEGFP-p53(AS),并建立了转染单细胞克隆系PEGFP-p53(AS)-801D及空载细胞系PEGFP-801D.PCR检测外源p53基因和neo基因存在于转染细胞系,而荧光显微镜下发现其胞浆有绿荧光蛋白表达.免疫组化染色p53突变蛋白在801D细胞系为阳性,而PEGFP-p53(AS)-801D为阴性,证明外源反义p53在转染细胞稳定表达并封闭内源突变蛋白表达.与母系相比,PEGFP-p53(AS)-801D集落形成抑制率为61%(P＜0.01),流式细胞仪检测该细胞系G1期细胞数明显增加,出现G1期阻滞的表现.MTT检测PEGFP-p53(AS)-801D对顺铂比母系更为敏感.结论有p53基因248密码点突变的801D细胞恶性增殖明显,对顺铂耐药,外源p53反义RNA可封闭突变蛋白表达,抑制细胞体外恶性增殖,增加对顺铂的药物敏感性.转染p53反义RNA可抑制p53突变的恶性表型或恢复野生型p53基因功能.
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Serglycin稳定干扰对鼻咽癌高转移细胞顺铂敏感性的影响及机制研究
目的：观察鼻咽癌高转移细胞5－8f的顺铂敏感性受Serglycin稳定干扰的影响，并对干扰机制进行初步探究。方法：建立Serglycin 稳定干扰的鼻咽癌高转移细胞株，分为三组：实验组5－8f KDA和5－8f KDC及对照组5－8f scrambled。测定Serglycin蛋白的表达情况；观察亲代及稳定株细胞形态；MTT法检测吸光度，绘制顺铂作用下的增殖曲线；测定细胞存活率；测定干细胞基因表达量；测定Vimentin 与 E－cadherin 含量。结果：实验组Serglycin基因表达被抑制，对照组Serglycin基因表达较多，差异具有统计学意义（P＜0．05）。实验组的分泌性Serglycin蛋白明显减少，对照组的Serglycin分泌蛋白表达较多。稳定组细胞形态呈圆形或多边形，对照组细胞为长梭形。MTT检测发现癌细胞受顺铂作用后第三天开始，对照组细胞吸光度增加较稳定组细胞明显快，差异有统计学意义（P＜0．05）。与5－8f scrambled组相比，实验组的细胞存活率明显下降，差异具有统计学意义（P＜0．05）。稳定组细胞干细胞基因表达明显降低，差异具有统计学意义（P＜0．05）。肿瘤组织中 Serglycin 能促进Vimentin 蛋白的表达，抑制E－cadherin 蛋白的表达。结论：Serglycin 稳定干扰可以增加鼻咽癌高转移细胞对顺铂的敏感性。
