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血清铜蓝蛋白水平在HBV携带伴妇科肿瘤患者治疗中的意义
目的 探究血清铜蓝蛋白水平对HBV携带伴妇科肿瘤患者治疗和预后的意义.方法 选取2013年6月1日至2016年7月3日于首都医科大学附属北京地坛医院住院的HBV携带伴妇科肿瘤患者90例为肿瘤组,包括42例良性肿瘤患者和48例恶性肿瘤患者,另外选取45例女性HBV携带者为对照组.采用免疫透射比浊法测定各组患者血清铜蓝蛋白含量,追踪随访20例恶性肿瘤根治术患者及6例术后复发患者的血清铜蓝蛋白水平,检测各组患者138和397位点上铜蓝蛋白的核心岩藻糖基化比率.结果 良性肿瘤及恶性肿瘤根治术后患者血清铜蓝蛋白含量与对照组相比,差异无统计学意义(t值分别为0.771、0.534,P值分别为0.586、0.711);恶性肿瘤患者血清铜蓝蛋白水平显著高于良性肿瘤组及对照组,差异有统计学意义(t值分别为3.259和1.365,P值分别为0.013和0.022);行恶性肿瘤根治术的20例患者中有6例肿瘤复发,铜蓝白水平显著升高(t=3.255,P=0.015).恶性肿瘤患者138位点和397位点铜蓝蛋白岩藻糖基化比率显著高于对照组及良性肿瘤组,差异有统计学意义(138位点:t值分别为3.567、4.556,P值分别为0.023、0.014;397位点:t值分别为4.598、4.620,P值分别为0.013、0.011).结论 检测肝脏合成的血清铜蓝蛋白水平对HBV携带伴妇科肿瘤患者的良、恶性鉴别有参考价值,并且对恶性肿瘤患者的随访具有一定意义.
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FUT8对megalin功能及白蛋白负荷致肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响
[目的]探讨α1-6-岩藻糖基转移酶(α1-6-fucosyltransferase,FUT8)所催化的核心岩藻糖基化对低密度脂蛋白受体相关蛋白-2(LRP-2,meglain)内吞白蛋白功能和对白蛋白超负荷诱导的肾小管上皮细胞炎症的影响.[方法]用10 mg/mL的牛血清白蛋白(BSA)孵育HK-2细胞4 h建立白蛋白超负荷细胞模型,分别用FUT8siRNA或FUT8过表达载体转染,用流式细胞仪测定白蛋白的绑定和内吞以及megalin的核心岩藻糖基化水平.用免疫印迹、免疫沉淀和凝集素印迹方法测定单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及megalin的蛋白表达,用单因素方差检验方法进行统计学处理.[结果]BSA的绑定和内吞有时间和浓度依赖性.BSA诱导后HK-2细胞FUT8、MCP-1明显升高.白蛋白超负荷条件下,FUT8过表达组细胞MCP-1表达水平明显高于BSA组.此外,FUT8的过表达显著提高megalin的核心岩藻糖基化水平及绑定和内吞白蛋白能力.沉默FUT8基因降低megalin的核心岩藻糖基化及绑定、内吞白蛋白能力,同时抑制MCP-1的升高,使其保持在正常表达水平.[结论]核心岩藻糖基化是megalin发挥白蛋白绑定和内吞功能的必需过程,抑制megalin蛋白合成后的核心岩藻糖基化修饰能够减轻蛋白超负荷诱导的肾小管上皮细胞炎症介质表达.
关键词： 核心岩藻糖基化 低密度脂蛋白相关蛋白-2 蛋白尿 HK-2细胞 -
雌孕激素对SMMC-7721人肝癌细胞α-1,6岩藻糖基转移酶的调控
目的探讨雌孕激素在肝癌细胞中对于α-1,6岩藻糖基转移酶表达的调控.方法通过对SMMC-7721细胞分别按不同时间点和不同浓度给予雌二醇和孕酮处理,观察细胞生长状态和形态学的改变,并进行半定量逆转录-聚合酶链式反应和小扁豆凝集素(LCA)印迹分析以检测α-1,6岩藻糖基转移酶基因(FUT8)转录水平和底物蛋白核心岩藻糖基化水平的改变.结果雌激素能明显上调FUT8基因的转录,并显著提高Mr为135×103、100×103和60×103 LCA反应阳性的糖蛋白的表达水平,同时改善了细胞的生长状态;而孕激素则可以明显下调FUT8基因的转录,并显著降低Mr为135×103、115×103、100×103和60×103 的LCA反应阳性的糖蛋白的表达水平,同时改变了细胞的正常形态.结论雌孕激素能通过调节α-1,6岩藻糖基转移酶的表达,改变靶蛋白的核心岩藻糖基化修饰,从而参与肿瘤的发生发展过程.
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精神分裂症患者免疫球蛋白核心岩藻糖基化组分的富集纯化及免疫学性质分析
目的：建立富集纯化精神分裂症患者免疫球蛋白核心岩藻糖基化组分的技术平台，分析其免疫学性质。方法采用蛋白G交联琼脂糖凝胶分离纯化血清免疫球蛋白G （IgG ），小扁豆凝集素（LCA ）亲和层析、富集纯化IgG中核心岩藻糖基化组分，免疫印迹分析LCA‐IgG的IgG亚型。结果血清IgG纯化率为62％，LCA‐IgG层析得率为4．59％。精神分裂症患者LCA‐IgG中可标记到IgG1、IgG2、IgG3亚型，IgG4未检出；而健康者LCA‐IgG可标记到IgG1～IgG4全部4个亚型。结论成功建立了富集纯化精神分裂症患者IgG核心岩藻糖基化组分的技术平台，揭示了患者LCA‐IgG亚型的分布特点及其与健康者的异同，为进一步研究患者的免疫病理机制提供了新的思路。
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人肝癌细胞转移相关蛋白膜联蛋白Ⅱ的筛查与分析
目的 应用糖组学方法筛查肝癌转移相关的异常核心岩藻糖基化蛋白,分析膜联蛋白Ⅱ(annexin Ⅱ)与肝癌细胞转移的关系.方法 双向电泳(2-DE)、凝集素亲和印迹及沉淀联合质谱筛查并验证肝癌转移相关核心岩藻糖基化蛋白;实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光和Westernblot测定annexin Ⅱ基因和蛋白表达.结果 不同转移潜能人肝癌细胞有核心岩藻糖基化蛋白差异表达,鉴定并验证annexin Ⅱ岩藻糖基化与肝癌转移相关;它分布于细胞质,在MH C C97-L和MHCC97-H中基因和蛋白质表达较Hep3B高.结论 Annexin Ⅱ转录、翻译水平和核心岩藻糖基化增加可能与肝癌转移潜能相关.
